同型半胱氨酸對巨噬細胞CD147表達的影響及他汀的干預作用.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病的主要病理學基礎，其發(fā)病機制極其復雜，目前多數(shù)學者認同“內(nèi)皮損傷學說”，即多種危險因素損傷內(nèi)皮細胞，內(nèi)膜通透性增高，脂質(zhì)進入內(nèi)膜，單核巨噬細胞滲入內(nèi)膜并吞噬脂質(zhì)，形成泡沫細胞;泡沫細胞不斷凋亡，形成脂質(zhì)核心，斑塊內(nèi)巨噬細胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)，降解細胞外基質(zhì)，導致纖維帽變薄，逐漸演變?yōu)椴环€(wěn)定性斑塊。因此巨噬細胞在AS過程

2、起了至關重要的作用。
　　CD147是一種表達于人體多種組織細胞膜上的跨膜糖蛋白，可誘導MMP表達，而MMP可降解構成粥樣斑塊纖維帽的主要成分，從而加速斑塊不穩(wěn)定。
　　同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是90年代被確定為新型的AS獨立危險因素，研究證實Hcy誘導多種細胞表達MMP增多，但對其具體機制尚未完全闡明，Hcy是否通過促進MMP的上游分子CD147表達而引起MMP分泌，參與AS發(fā)生發(fā)展過程，目前鮮有報

3、道。
　　他汀類藥物不僅具有強大降脂作用，且能穩(wěn)定及逆轉動脈粥樣斑塊進展。有研究證實他汀能抑制斑塊內(nèi)CD147及MMP表達，而Hcy是動脈斑塊進展的危險因素，他汀能否抑制Hcy誘導的CD147表達，目前未見報道。
　　目的：
　　1、探討Hcy對U-937來源巨噬細胞CD147表達的影響。
　　2、瑞舒伐他汀干預Hcy處理的巨噬細胞，確定其對Hcy誘導CD147表達的影響。
　　3、MTT檢測Hcy、瑞舒伐

4、他汀對U-937來源巨噬細胞活性的影響。
　　方法：
　　1、構建巨噬細胞模型
　　將U937細胞以5×105/L密度接種于細胞板中，加10nmol/L佛波酯(PMA)刺激48h，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定分化為巨噬細胞。
　　2、Hcy、瑞舒伐他汀干預
　　分化為巨噬細胞后，換無血清培養(yǎng)24h，按如下處理:(1)分別加入濃度為0、50、100、500umol/L的Hcy孵育48h。(2)500umol/L

5、Hcy孵育0、12、24、48h。(3)0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的瑞舒伐他汀和500umol/LHcy共培養(yǎng)48h。PCR、Westernblot、免疫熒光檢測巨噬細胞CD147的表達。
　　3、MTT檢測細胞活性
　　將U937細胞以2×104個細胞/孔接種于96孔板中，Hcy、瑞舒伐他汀處理后，加10ulMTT溶液(5g/L)，37℃孵育4h，棄上清，加100ulDMSO，震蕩10min，酶標

6、儀上測490nm處吸光度。
　　4、統(tǒng)計學處理
　　實驗數(shù)據(jù)采用x±s表示，應用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，多組樣本均數(shù)比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、未處理的U937細胞為形態(tài)均一類圓形，呈懸浮生長。PMA處理48h，可見細胞貼壁生長，為梭形、星狀或不規(guī)則形。
　　2、PCR:CD147mRNA表達量隨Hcy濃度升高（或Hcy孵育時間延長）而逐

7、漸增加，其中100、500umol/LHcy組（或24h、48hHcy組）較對照組明顯增加(P＜0.05)。瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理細胞48h后，CD147mRNA隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少，其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀組CD147mRNA較對照組明顯減少(P＜0.05)。
　　3、western blot:CD147蛋白表達量隨著Hcy的濃度升高（或Hcy孵育時間延長）而逐漸增加，其中，100

8、、500umol/LHcy組（或24h、48hHcy組）與對照組相比，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。不同濃度瑞舒伐他汀與500umol/LHcy共處理U-937細胞48h后，CD147蛋白表達量隨瑞舒伐他汀濃度增加而逐漸減少，其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀組較對照組明顯減少(P＜0.05）。
　　4、免疫熒光:0umol/LHcy處理的細胞膜上熒光淺淡，500umol/LHcy處理的熒光明顯增強。而10-5mol/L瑞