同型半胱氨酸對(duì)大隱靜脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及染料木黃酮的干預(yù)作用.pdf

1、本文論述了同型半胱氨酸對(duì)大隱靜脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及染料木黃酮的干預(yù)作用，主要內(nèi)容如下： 第一部分同型半胱氨酸對(duì)大隱靜脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 目的：研究同型半胱氨酸(Hcy)對(duì)原代培養(yǎng)的大隱靜脈平滑肌細(xì)胞(GSVSMC)增殖及凋亡的影響，尋找合適的促使GSVSMC增殖的濃度及時(shí)間。 方法：采用貼塊法原代培養(yǎng)GSVSMC，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，并用肌動(dòng)蛋白免疫熒光法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。選擇生長(zhǎng)良好的第

2、3～4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分為(1)空白對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)基；(2)Hcy濃度組：不同濃度的Hcy(100gmol/L、2001xmol/L、5001μnol/L、10001μnol/L)培養(yǎng)細(xì)胞24h；(3)Hcy時(shí)間組：500μmol/L的同型半胱氨酸，培養(yǎng)不同的時(shí)間(6h、12h、24h、48h)。用MTT法測(cè)定光吸收度，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)增殖率。采用流式細(xì)胞儀AnncxinV/PI雙標(biāo)記染色法分析Hcy對(duì)GSVSMC凋亡率的影響。

3、 結(jié)果：1.正常細(xì)胞生長(zhǎng)良好，呈放射性生長(zhǎng)，呈現(xiàn)SMC典型的“峰”、“谷”樣生長(zhǎng)。a-actin免疫熒光法染色可見細(xì)胞胞漿內(nèi)均有綠色熒光，證實(shí)為SMC，細(xì)胞純度在90％以上。 2.MTT實(shí)驗(yàn)顯示，在作用時(shí)間相同的條件下，隨著Hcy作用濃度的增加，GSVSMC的增殖越明顯，存在著濃度依賴性效應(yīng)關(guān)系，但500μmol/L與1000μmol/L時(shí)其差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在Hcy濃度相同的條件下，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，GS

4、VSMC的增殖越明顯。 3.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，在作用時(shí)間相同的條件下，GSVSMC的凋亡率隨Hcy濃度增加而降低，但500μmol/L與1000μmol/L時(shí)其差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在作用濃度相同的條件下，GSVSMC的凋亡率隨Hcy的作用時(shí)間延長(zhǎng)而降低(P<0.05)。 第二部分染料木黃酮對(duì)高同型半胱氨酸環(huán)境下大隱靜脈平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 目的：觀察染料木黃酮(Gen)對(duì)高同型半胱氨酸環(huán)境下GSVSMC生長(zhǎng)的影

5、響。 方法：將細(xì)胞隨機(jī)分組：(1)空白對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)基；(2)Hcy組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)細(xì)胞24h=(3)Hcy+Gen濃度組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的Gen(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)培養(yǎng)24h；(4)Hcy+Gen時(shí)間組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)24h后，加入10mg/L的Gcn培養(yǎng)不同的時(shí)間(12h、24h、48h、72h)。用MTT法測(cè)定

6、光吸收度，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。采用流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙標(biāo)記染色法分析Gen對(duì)GSVSMC凋亡率的影響。 結(jié)果：1.MTT實(shí)驗(yàn)顯示，在作用時(shí)間相同的條件下，隨著Gen作用濃度的增加，GSVSMC的增殖抑制率增高；在Gen濃度相同的條件下，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，GSVSMC的增殖抑制率增高，與對(duì)照組相比較有明顯差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 2.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，在作用時(shí)間相同的條件下，GSVSMC的凋