CD147、MCT1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及CD147單抗對U251細(xì)胞代謝干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 本研究通過免疫組化方法檢測人腦膠質(zhì)瘤中MCTl和CD147的表達(dá)，探討其表達(dá)與腫瘤級別的關(guān)系；并在體外試驗(yàn)中使用CDl47基因工程單抗影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面MCTl的表達(dá)，觀察它對腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的干擾、對糖酵解代謝影響和抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。 方法： 一．標(biāo)本來源：收集四川大學(xué)華西醫(yī)院1998年9月至2000年9月間60例腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本，分為低級別膠質(zhì)瘤組(28例)和高級別膠質(zhì)瘤組(32例)，對照組10例為內(nèi)

2、減壓術(shù)中切除的正常腦組織。體外實(shí)驗(yàn)采用U251人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。 二．主要試劑：MCTl，CDl47均為鼠抗人單克隆抗體、S-P免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒、FTTC羊抗鼠免疫熒光二抗、CDl47基因工程單抗。 三．方法：將膠質(zhì)瘤和對照腦組織標(biāo)本制成石蠟切片并進(jìn)行免疫組化染色，檢測低、高級別膠質(zhì)瘤和對照標(biāo)本MCTl和CDl47的表達(dá)水平。U251細(xì)胞分為對照組，低劑量組和高劑量組，培養(yǎng)中分別加入不同劑

3、量的CDl47基因工程單抗封閉細(xì)胞表面CDl47分子，用免疫熒光法檢測各組細(xì)胞膜上MCTl表達(dá)分布情況，并用分光光度計(jì)檢測各組細(xì)胞內(nèi)乳酸含量，繪制三組細(xì)胞的生長曲線并記錄各組生長數(shù)據(jù)，以上資料均作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 四．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：3組間計(jì)量資料的比較采用方差分析，2組間計(jì)數(shù)資料比較采用x<'2>檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)分析均在SPSSl2.O軟件中完成。 結(jié)果： 一．膠質(zhì)瘤標(biāo)本中均有MCTl和CDl47高表達(dá)，且高級別膠質(zhì)瘤組

4、中二者表達(dá)水平高于低級別組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 二．在細(xì)胞培養(yǎng)研究中，低劑量組和高劑量組細(xì)胞膜表面。MCTl出現(xiàn)表達(dá)分布的改變，表現(xiàn)為胞膜不完整表達(dá)增多，完整表達(dá)減少，胞漿中MCTl顆粒出現(xiàn)無效堆積，而對照組MCTl表達(dá)無明顯變化。 三．細(xì)胞內(nèi)乳酸含量在低、高劑量組明顯增高，倍增時(shí)間、最大細(xì)胞密度等生長指標(biāo)在實(shí)驗(yàn)組中明顯抑制，生長曲線低平。且以上改變在低劑量組和高劑量組中亦存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 一．人

5、膠質(zhì)瘤中存在MCTl和CDl47的高表達(dá)，且在高級別膠質(zhì)瘤中二者表達(dá)更強(qiáng)。 二．在同一腫瘤標(biāo)本上，CDl47和MCT1在腫瘤實(shí)質(zhì)部分的表達(dá)強(qiáng)度相當(dāng)一致；而在瘤周間質(zhì)部分，CDl47表達(dá)更為廣泛。 三．初步發(fā)現(xiàn)MCTl表達(dá)與膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)和預(yù)后有一定關(guān)系，MCTl呈陽性表達(dá)的膠質(zhì)瘤更易復(fù)發(fā)，患者生存期更短。 四．CDl47單抗可使實(shí)驗(yàn)組MCTl表達(dá)分布發(fā)生明顯變化：細(xì)胞膜上有效分布減少、細(xì)胞內(nèi)乳酸堆積、生長受到抑制，