HPV16-18 E7對(duì)宮頸癌細(xì)胞中HDAC1表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的:宮頸癌是女性多發(fā)的惡性腫瘤,而人類乳頭瘤病毒(HPV)感染是早已被臨床和流行病學(xué)研究證實(shí)的宮頸癌發(fā)生發(fā)展的主要因素。其中HPV16、18是臨床檢出率相對(duì)較高的兩種HPV高危亞型。HPV病毒編碼的E7是重要的原癌蛋白,在腫瘤發(fā)生中起著重要作用。表觀遺傳學(xué)改變是另一個(gè)與腫瘤發(fā)生相關(guān)的因素,很多腫瘤中都觀察到異常水平的HDAC1的表達(dá)。而HPV感染類型不同與HDAC1表達(dá)的關(guān)系未見報(bào)道,因此我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)觀察不同HPV感染情況的宮

2、頸癌細(xì)胞系中HDAC1的表達(dá)情況,以及E7對(duì)HDAC1表的的影響。另外,E7蛋白分為三個(gè)結(jié)構(gòu)域,對(duì)HDAC1的表達(dá)改變有重要作用的分區(qū)尚不明確,因此我們構(gòu)建了分別缺失各一個(gè)結(jié)構(gòu)域的突變體,以期在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)其功能改變。
　　 方法及結(jié)果:
　　 1.HDAC1在人宮頸癌細(xì)胞系C-33A中表達(dá)高于CaSki和HeLa
　　 用RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)人宮頸癌細(xì)胞系C-33A、CaSki和H

3、eLa中HDAC1的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平差異。結(jié)果顯示,HDAC1在C-33A(無HPV感染)中表達(dá)最高,CaSki(HPV16感染)中次之,HeLa(HPV18感染)中最低。
　　 2.轉(zhuǎn)染HPV16E7,HPV18E7后C-33A細(xì)胞系中HDAC1表達(dá)降低
　　 向無HPV感染的C-33A細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEGFP-HPV18E7和pEGFP-N1空載體,通過RT-PCR和Western Blot觀察轉(zhuǎn)染后兩組HDAC1表達(dá)量

4、差異。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染pEGFP-HPV18E7組的C-33A細(xì)胞中的HDAC1的表達(dá)明顯低于轉(zhuǎn)染pEGFP-N1組。
　　 3.RNAi策略沉默CaSki細(xì)胞HPV16E7導(dǎo)致HDAC1表達(dá)上調(diào)
　　 向HPV16感染的CaSki細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA沉默HPV16E7,對(duì)照組轉(zhuǎn)染無關(guān)序列,通過RT-PCR觀察轉(zhuǎn)染后HDAC1表達(dá)改變。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染siRNA組的HDAC1的表達(dá)明顯高于轉(zhuǎn)染無關(guān)序列組。
　　 4.構(gòu)

5、建HPV16E7不同結(jié)構(gòu)域缺失表達(dá)載體
　　 用已克隆到pEGFP-N1載體上測(cè)序正確的HPV16E7的cDNA為模板,經(jīng)常規(guī)PCR或一步反向PCR致突變策略擴(kuò)增得到不同HPV16E7結(jié)構(gòu)域缺失的表達(dá)載體:pEGFP-HPV16E7/CR1&2、pEGFP-HPV16E7/CR1&3和pEGFP-HPV16E7/CR2&3。
　　 結(jié)論:
　　 1.HDAC1在不同HPV感染的宮頸癌細(xì)胞系中表達(dá)有差異,在C-33