siRNA抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞株HPV16 E6和E7基因的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文siRNA抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞株HPV16 E6和E7基因的研究姓名：沈青麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦科腫瘤指導(dǎo)教師：林仲秋20060501◇! ．．之t l s i R N A 抑制宮頸癌S i H a 細(xì)胞林人乳頭瘤病毒1 6 型E 6 和E 7 基因的研究 中文摘要而還沒有關(guān)于共同沉默E 6 和E 7 是否較單獨沉默E 6 或E 7 對u P V l j H 性細(xì)胞增殖的抑制作用和凋亡的促進(jìn)作用更強(qiáng)的報道。本

2、研究采用R N A i 技術(shù)探討共沉默人乳頭瘤病毒1 6 型E 6 署f l E 7 基因，是否較單獨沉默E 6 或E 7 基因更好地促進(jìn)H P V [ j 日性細(xì)胞的凋亡和抑制其增殖。材料和方法1 ．細(xì)胞培養(yǎng)和分組S i H a 細(xì)胞株用R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)基( 添加1 0 ％新生牛血清) ，置于含5 ％c O ．、3 7 。C 的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實驗分組為：未轉(zhuǎn)染組、陰性對照組、陽性對照組、E 6s i R N A

3、 轉(zhuǎn)染組、E 7 s i R N A轉(zhuǎn)染組和E 6s i R N A 及E 7 s i R N A 共轉(zhuǎn)染組，進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測時另設(shè)轉(zhuǎn)染試劑對照組。2 ．流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率以熒光標(biāo)記的陰性對照s i R N A 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，于轉(zhuǎn)染后2 4 4 ' , 時流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率。3 ．半定量R T —P C R 檢測轉(zhuǎn)染、R N A 提取和檢測本身的可靠性以及E 6 和E 7m R N A 水平的變化分別提取轉(zhuǎn)染后4 8 d &

4、#39; , 時各組細(xì)胞的總R N A ，以E 6 、E 7 、G A P D H 和1 3 一a c t i n 相應(yīng)引物進(jìn)行半定量R T —P C R ，瓊脂糖凝膠電泳后，用G e n et o o l s 凝膠圖像掃描分析軟件對P C R 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果進(jìn)行攝像、分析。3 ．M T T 法檢測轉(zhuǎn)染后4 8 小時各組細(xì)胞的增殖3轉(zhuǎn)染前一天將S i H a 細(xì)胞株以7 ．5 ×1 0 個細(xì)胞／孔接種于9 6 孔培養(yǎng)板，每