hnRNP E1與HPV16早期基因E2和E6在宮頸病變中的作用及交互效應(yīng).pdf

1、目的：人乳頭瘤病毒（human papilloma virus, HPV），特別是高危型HPV（HR-HPV）16持續(xù)感染是宮頸癌及其癌前病變最主要的病因因素，HPV DNA與宿主細(xì)胞DNA整合是病毒致癌作用的重要機(jī)制。HPV16早期基因E2和E6是與病毒致癌密切相關(guān)的基因，E2是HPV整合的關(guān)鍵基因，E6是病毒癌基因。核不均一核糖核蛋白E1（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein，hnRNPE1

2、）在基因轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中具有獨(dú)特作用，特別值得關(guān)注的是，hnRNP E1特有的KH域提供了與HPV16基因發(fā)生特異性結(jié)合的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)，但hnRNPE1在宮頸病變中的作用及與HPV16 E2和E6的關(guān)系尚不清楚。本次研究以不同宮頸病變患者為研究對(duì)象，明確其HPV感染狀態(tài)，檢測(cè)不同級(jí)別宮頸組織中hnRNP E1蛋白表達(dá)水平，以及與HPV16整合相關(guān)基因 E2蛋白表達(dá)水平和致癌基因E6蛋白表達(dá)水平。以期揭示 hnRNP E1與HPV16早

3、期基因E2和E6在宮頸癌變進(jìn)展中的作用及相互關(guān)系，為進(jìn)行HPV致宮頸癌作用機(jī)制的研究提供新思路。
　　方法：于2014年6月至9月在山西省介休市建立的自然人群宮頸病變隊(duì)列中，分別選取正常宮頸婦女（NC）56例，低度宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ）患者58例和高度宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅡ/Ⅲ）患者50例，以及2015年11月至2016年5月在山西省腫瘤醫(yī)院就診的宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)病人40例作為研究對(duì)象，所有的研究對(duì)象都是經(jīng)液基薄層細(xì)

4、胞檢測(cè)技術(shù)（TCT）篩查、陰道鏡檢查、最終由病理學(xué)確診的。在獲得知情同意的情況下，采用結(jié)構(gòu)式問(wèn)卷收集全部研究對(duì)象的人口學(xué)特征、生活習(xí)慣、個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣和生殖情況等資料，同時(shí)采集全部研究對(duì)象宮頸組織活檢標(biāo)本和宮頸脫落細(xì)胞。采用導(dǎo)流雜交法檢測(cè)HPV感染狀況，Western blot檢測(cè)hnRNP E1以及HPV16早期基因E2和E6蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行相關(guān)資料的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)、Bonferroni檢

5、驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、χ2趨勢(shì)檢驗(yàn)、Spearman秩相關(guān)分析、logistic回歸和因子分析，應(yīng)用相加模型、相乘模型及廣義多因子降維（GMDR）模型進(jìn)行交互作用評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：⑴HPVs/HPV16感染與宮頸病變的關(guān)系: HPVs感染率（41.38％、58.00%、87.5%）和 HPV16感染率(15.52%、40.00%、67.50%)在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和 SCC組均高于NC組的感染率（16.07%、8.93%），并隨著宮頸

6、病變嚴(yán)重程度加重均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。HPVs感染（CINⅠ: aOR=3.62(1.41-9.29); CINⅡ/Ⅲ: aOR=6.44(2.48-16.72); SCC: aOR=28.32(5.24-98.46)）和 HPV16感染(CINⅠ: aOR=1.73(0.51-5.86);CINⅡ/Ⅲ:aOR=5.96(1.92-18.49);SCC:aOR=13.96(3.33-58.50)）與宮頸病變之間均呈正關(guān)聯(lián)。⑵hnRNP E1與

7、宮頸病變的關(guān)系:hnRNP E1表達(dá)量在不同宮頸病變組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=9.979, P=0.019），隨著宮頸病變嚴(yán)重程度加重呈現(xiàn)降低趨勢(shì)（χ2趨勢(shì)=9.50，P=0.002），hnRNP E1表達(dá)量與CINⅡ/Ⅲ和SCC之間均呈負(fù)關(guān)聯(lián)。hnRNP E1低表達(dá)與 HPV16感染在宮頸病變中存在正相加交互作用，而相乘交互作用未顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑶HPV16早期基因 E2和 E6與宮頸病變的關(guān)系: HPV16 E2表達(dá)水平（H=16

8、.20，P=0.001）與HPV16 E6表達(dá)水平（H=15.44，P=0.001）在不同宮頸病變組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HPV16 E2蛋白表達(dá)量在SCC組和CINⅡ/Ⅲ組均低于NC組，SCC組低于CINⅠ組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其它組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HPV16 E6蛋白表達(dá)量?jī)H在SCC組與CINⅠ組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余任意兩組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E2/E6比值與宮頸病變程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。⑷hnRNP E1與 HPV16早期

9、基因E2和E6在宮頸病變中的交互作用:應(yīng)用廣義多因子降維模型（GMDR）分析顯示，hnRNP E1低表達(dá)/HPV16 E2低表達(dá)/HPV16 E6高表達(dá)在CINⅡ/Ⅲ和SCC組存在交互作用，而在CINⅠ組未發(fā)現(xiàn)類(lèi)似交互作用存在（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①HPVs/HPV16感染是宮頸病變發(fā)生的危險(xiǎn)因素，預(yù)防和控制HPVs/HPV16感染可降低宮頸病變發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。②hnRNP E1低表達(dá)可增加CINⅡ/Ⅲ和SCC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，提示

10、hnRNP E1表達(dá)可以反映宮頸病變進(jìn)展情況，hnRNP E1低表達(dá)可能是宮頸病變加重的有效指標(biāo)，可以作為高度宮頸病變和癌變的診斷和預(yù)測(cè)依據(jù)，且hnRNP E1低表達(dá)與HPV16感染在宮頸病變的發(fā)生中可能存在協(xié)同作用。③HPV16整合關(guān)鍵基因E2蛋白低表達(dá)與主要致癌基因E6蛋白高表達(dá)是SCC發(fā)生的危險(xiǎn)因素，是宮頸癌變的有效指標(biāo)，可以作為SCC的診斷依據(jù)。E2/E6比值與宮頸病變程度呈負(fù)相關(guān)，可以反映宮頸病變的進(jìn)展情況。④hnRNP E1