HPV E7通過SIRT1調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境對宮頸癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：研究證實(shí)人乳頭瘤病毒（human papilloma virus, HPV）與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中HPV E7癌蛋白是參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要因素，但這種變化影響的細(xì)胞信號途徑尚未闡明。近年來研究表明依賴于NAD+的組蛋白去乙?；窼IRT1與腫瘤的微環(huán)境密切相關(guān)，是腫瘤治療的潛在靶標(biāo)。本研究擬通過在組織水平檢測宮頸組織SIRT1蛋白與E7蛋白的表達(dá)并分析兩者之間的相關(guān)性；在細(xì)胞水平進(jìn)一步研究E7與SIRT1及腫瘤微環(huán)境之

2、間的關(guān)系，探討SIRT1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　方法：收集從2014年1月～2014年3月青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織石蠟標(biāo)本，選取臨床病理資料完整者103例（包括正常宮頸組織，CINⅠ, CINⅡ-CINⅢ及宮頸鱗癌），免疫組織化學(xué)方法檢測組織中HPV E7和SIRT1蛋白的表達(dá)，并分析兩者的相關(guān)性；化學(xué)合成靶向HPV E7基因的小干擾RNA轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞； RT-PCR檢測SiHa細(xì)胞中E7

3、mRNA的表達(dá)；免疫印跡法檢測SiHa細(xì)胞中E7、SIRT1、Notch-1、Hes-1、HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)；應(yīng)用細(xì)胞毒性檢測試劑盒（CCK-8）檢測細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示：在正常宮頸組織及程度較輕的宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ級）中均未見SIRT1的表達(dá)，25例CINⅡ-Ⅲ組織中的表達(dá)陽性率為32%（8/25），而20例宮頸癌組織中的表達(dá)陽性率為60%（12/20）。在正常宮頸組織中E7的表達(dá)呈陰性，

4、38例CINⅠ級中E7表達(dá)的陽性率為21%（8/38），25例CINⅡ-Ⅲ組織中E7表達(dá)的陽性率為48%（12/25），而20例宮頸癌組織中E7表達(dá)陽性率60%（12/20）。確切概率法分析E7與SIRT1的相關(guān)性結(jié)果顯示：E7與SIRT1之間呈正相關(guān)關(guān)系（P=0.019）。RT-PCR結(jié)果表明：與對照組相比，siRNA-E7干擾組細(xì)胞E7 mRNA表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05）。Western blot結(jié)果顯示：與對照組相比，siRNA

5、-E7干擾組細(xì)胞中E7與SIRT1蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)（P＜0.05），而Notch-1、Hes-1及HIF-1α的表達(dá)明顯上調(diào)，VEGF的表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05）。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：siRNA-E7轉(zhuǎn)染組抑制率、siRNA陰性對照組抑制率及轉(zhuǎn)染試劑組抑制率分別為38%、9%及7.4%，轉(zhuǎn)染組的抑制率明顯高于其他組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：宮頸癌組織中E7與SIRT1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。靶向E7的siRNA能有