高壓電燒傷大鼠血清IL-3、GM-CSF的變化及烏司他丁、甲強(qiáng)龍的干預(yù)作用.pdf

1、目的:高壓電燒傷有別于其他燒傷，是一種特殊原因所致的機(jī)體損傷，可使機(jī)體產(chǎn)生一系列連鎖反應(yīng)，導(dǎo)致微循環(huán)障礙其中血小板流變性變化及數(shù)量異常是導(dǎo)致機(jī)體微循環(huán)障礙的關(guān)鍵因素之一。燒傷后血管受損害或破裂，血小板受刺激被激活，由靜止相變?yōu)闄C(jī)能相，進(jìn)一步影響血小板生成。血小板生成素（thromboietin，TPO）和巨核細(xì)胞集落刺激因子（megakaryocyte colony stimulating factor, MK-CSF）是血小板生成的正

2、調(diào)節(jié)因子。當(dāng)機(jī)體血小板減少時(shí)，TPO及MK-CSF調(diào)節(jié)巨核細(xì)胞祖細(xì)胞增殖產(chǎn)生巨核細(xì)胞，MK-CSF刺激巨核細(xì)胞成熟，促進(jìn)巨核細(xì)胞胞質(zhì)與細(xì)胞核脫離、分割，形成血小板并釋放入血。IL-3和IL-6在血小板形成過(guò)程中發(fā)揮正調(diào)節(jié)作用，IL-3可刺激巨核細(xì)胞增殖，IL-6可加速巨核細(xì)胞成熟分化，且兩者協(xié)同加速血小板生成。粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，

3、GM-CSF)和促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin，EPO)對(duì)巨核細(xì)胞生成血小板也具有非特異性正調(diào)節(jié)作用。其中IL-3、GM-CSF是血小板生成正性調(diào)節(jié)的重要元素，可反映體內(nèi)血小板計(jì)數(shù)及凝血過(guò)程的變化。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，旨在研究高壓電燒傷早期大鼠血清IL-3、GM-CSF變化，并通過(guò)烏司他丁(UTI)、甲強(qiáng)龍(MP)進(jìn)行干預(yù)，研究燒傷后血小板生成及流變性變化機(jī)制，探討UTI、MP治療高壓電燒傷的可行性。
　　方法:<

4、br>　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:健康成年SD大鼠（由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證編號(hào)為1303144）240只，按隨機(jī)數(shù)字表法分成四組，即假高壓電燒傷組（簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組）、高壓電燒傷組（簡(jiǎn)稱(chēng)電傷組）、高壓電燒傷治療組（簡(jiǎn)稱(chēng)治療組），其中治療組分為UTI、MP組，每組各60只。每組又按觀察時(shí)間分為電擊前15min、電擊后5min、電擊后1h、2h、4h、8h六個(gè)時(shí)相組，每時(shí)相10只。
　　2.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:將大鼠編號(hào)、稱(chēng)重，左上肢、右

5、下肢及前胸脫毛。將實(shí)驗(yàn)藥品按實(shí)驗(yàn)需要配成所需濃度。
　　3.高壓電燒傷模型制作:首先連接好實(shí)驗(yàn)變壓器和調(diào)壓器電線。用1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，按40mg/kg給藥，麻醉成功后，將大鼠仰臥于專(zhuān)用電擊實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，固定四肢，將兩個(gè)1 cm×1 cm電極片分別固定于大鼠的左上肢（電流入口）、右下肢（電流出口）脫毛區(qū)。接通電源后，調(diào)整調(diào)壓器使升壓器輸出電壓至2kV，連接升壓器，使高壓電流通過(guò)大鼠，電擊3s。對(duì)照組制作假電傷模型，不合閘通

6、過(guò)電流，其余步驟與電傷組一致。電擊5min內(nèi)，兩個(gè)治療組腹腔分別注射5×104u/kg UTI、250mg/kg MP，對(duì)照組及電傷組腹腔內(nèi)注射等量的生理鹽水。
　　4.標(biāo)本采集與保存:將高壓電燒傷模型復(fù)制成功的大鼠開(kāi)胸暴露心臟，直視下心臟抽血6mL，置于一次性使用真空采血管（紅）中，輕輕顛倒數(shù)次后靜置30min，上離心機(jī)，以3000轉(zhuǎn)/min離心10min，紅管中取上清液置于Eppendorf管中在-70℃條件下保存。
　

7、　5.指標(biāo)檢測(cè):置于冰箱的血清采用ELISA雙夾心抗體法，檢測(cè)IL-3、GM-CSF含量。
　　6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，行兩因素析因設(shè)計(jì)的方差分析，多重比較采用LSD法t檢驗(yàn)。以P＜0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠血漿IL-3含量變化電傷組IL-3數(shù)值與對(duì)照組相比明顯升高(P＜0.01)，且IL-3數(shù)值含量電傷后在一定時(shí)間內(nèi)有顯著差異(P＜0.01)，呈上升趨勢(shì)。治療組IL-

8、3數(shù)值總體低于電傷組(P＜0.01)，且IL-3數(shù)值含量治療后在一定時(shí)間內(nèi)有顯著差異(P＜0.01)，傷后5min、1h、2h、4h、8h與傷前相比有較明顯明顯差異(P＜0.01)。
　　2.大鼠血漿GM-CSF含量變化電傷組GM-CSF含量總體高于對(duì)照組(P＜0.01)，且GM-CSF含量受傷后隨時(shí)間有顯著差異(P＜0.01)，呈增高趨勢(shì)。治療組GM-CSF含量總體低于電傷組(P＜0.01)，且GM-CSF含量治療后隨時(shí)間有顯著