高壓電燒傷大鼠白細胞CD11c-CD18的動態(tài)變化及己酮可可堿和烏司他丁的干預作用.pdf

1、背景：在前期高壓電燒傷動物試驗研究中，采用WX-9B型多部位微循環(huán)顯微儀及微循環(huán)圖像分析系統(tǒng)，觀察動物的腸系膜、腸黏膜、軟腦膜、肝臟、胰腺、腎皮質(zhì)、胃黏膜、深筋膜等的微循環(huán)變化，不僅引起局部組織器官微循環(huán)紊亂，而且還引起遠隔組織器官的微循環(huán)紊亂，從而導致全身性微循環(huán)障礙，并觀察到毛細血管內(nèi)血流減慢、白細胞沿壁翻滾及黏附、微白栓形成及紅細胞聚集等現(xiàn)象。白細胞黏附是高壓電燒傷后微循環(huán)障礙的重要變化之一，介導白細胞與血管內(nèi)皮細胞黏附的主要黏附

2、分子為細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和β2-整合素，其中β2-整合素包括淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1、CD11a/CD18)、巨噬細胞表面抗原-1(Mac-1、CD11b/CD18)、P150.95(CD11c/CD18)和αDβ2(CD11d/CD18)。前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，高壓電燒傷大鼠血液中的可溶性細胞黏附分子-1(sICAM-1)、CD11b/CD18均增加，是白細胞與血管內(nèi)皮黏附的重要原因之一。CD11c/CD18在

3、高壓電燒傷白細胞黏附過程中是否起作用，目前相關研究較少，為此我們設計了本次實驗。
　　目的：通過觀察高壓電燒傷早期大鼠白細胞膜上CD11c/CD18表達的連續(xù)變化，進一步探討高壓電燒傷微循環(huán)障礙的機制，及己酮可可堿(PTX)和烏司他丁(UTI)對整合素家族中CD11c/CD18表達的干預，為高壓電燒傷的臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.實驗動物分組：將成年健康SD大鼠(由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證編

4、號786657，雌雄不拘，雌鼠未孕，體重280～360g)240只，隨機分成四組，每組各60只，分別為假高壓電燒傷組(對照組)，高壓電燒傷實驗組(實驗組)、高壓電燒傷己酮可可堿治療組(PTX干預組)和高壓電燒傷烏司他丁治療組(UTI干預組)。每一組又分6個時相，分別為電擊前(T0)、電擊即刻(15min)(T1)、傷后1h(T2)、2h(T3)、4h(T4)、8h(T5)，每時相10只。各組分別編號后分籠飼養(yǎng)。
　　2.實驗前準備

5、：對大鼠稱重，并按編號記錄在冊。剃除大鼠左上肢、右下肢及胸部被毛。將大鼠置于室溫(24～26)℃和濕度(35～45)％RH相對恒定的實驗室中，保溫、禁食、自由飲水，過夜。根據(jù)實驗要求，配備實驗藥品濃度。
　　3.模型復制：將麻醉成功的大鼠固定放置于高壓輸出電路之間，接通電源，調(diào)整變壓器輸出電壓2千伏，電擊三秒鐘后斷電，電極夾接觸局部組織形成三度燒傷創(chuàng)面，大鼠軀體仍處于痙攣、僵直狀態(tài)，心跳呼吸存在，高壓電燒傷試驗動物模型復制成功。對

6、照組不通電致假傷，其他條件各組均相同。PTX干預組在電擊后即刻(1分鐘內(nèi))大鼠腹腔注射PTX(50mg/kg)，UTI干預組在電擊后即刻(1分鐘內(nèi))腹腔注射UTI(2萬單位/kg)。
　　4.標本采集與處理：在不同的時相，將復制成功高壓電燒傷大鼠模型麻醉后開胸，直視下心臟取血，收集1.5mL全血置于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA·K2)抗凝管，混勻。將標本去除紅細胞，標記免疫熒光單克隆抗體，制成白細胞懸液待檢。
　　5.指標檢測

7、：采用流式細胞儀進行檢測高壓電燒傷早期不同時相白細胞膜上CD11c/CD18的陽性表達(％)。
　　6.實驗數(shù)據(jù)處理：應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析處理，實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(X±S)表示，采用完全隨機的三因素析因設計的方差分析(ANOVA)，p＜0.05為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　白細胞膜上CD11c/CD18的陽性表達變化：
　　1.對照組內(nèi)各時相白細胞膜上CD11c/CD18陽性表達無

8、顯著性差異(p＞0.05)。
　　2.實驗組不同時相白細胞膜上CD11c/CD18陽性表達高于對照組和電前的水平(p＜0.05)；組內(nèi)T0、T1、T2、T3、T4時相CD11c/CD18陽性表達逐漸增高，到T4時相表達最高；T5時相較T4時相低，相鄰時相間比較有顯著性差異(p＜0.05)。
　　3.PTX干預組不同時相白細胞膜上CD11c/CD18陽性表達高于對照組和電前的水平(p＜0.05)；組內(nèi)T1、T2、T3、T4、T

9、5時相CD11c/CD18陽性表達逐漸增高，到T5時相表達最高；相鄰T1和T2、T2和T3、T4和T5時相間比較有顯著性差異(p＜0.05)，而T3和T4時相間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4.UTI干預組不同時相白細胞膜上CD11c/CD18陽性表達高于對照組和電前的水平(p＜0.05)；組內(nèi)T1、T2、T3、T4時相CD11c/CD18陽性表達逐漸增高，到T4時相表達最高，T5時相較T4時相低；相鄰T1和T2、T2和

10、T3、T3和T4時相間比較有顯著性差異(p＜0.05)；而T4和T5時相間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5.實驗組與PTX干預組比較：PTX干預組T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11c/CD18的陽性表達低于實驗組(p＜0.05)；而兩組T1、T2時相間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　6.實驗組與UTI干預組比較：UTI干預組T2、T3、T4、T5時相白細胞膜上CD11c/CD18的陽性表達低于實驗組UT

11、I干預組(p＜0.05)；而兩組T1時相間比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　7.PTX干預組和UTI干預組比較：兩組T1、T2、T3、T4時相間CD11c/CD18的陽性表達比較無顯著性差異(P＞0.05)；而兩組T5時相間比較有顯著性差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.高壓電燒傷可致大鼠血液中白細胞膜上CD11c/CD18的表達上調(diào)，增加了白細胞的黏附，在造成微循環(huán)障礙方面有重要作用。
　　2.在