高壓電燒傷大鼠核因子κB(NF-κB)和環(huán)磷酸腺苷(cAMP)變化及烏司他丁的干預(yù)作用.pdf

1、目的：高壓電燒傷有著特殊的致傷原因及特殊的病理特點(diǎn)，其致病機(jī)理復(fù)雜、對(duì)全身各系統(tǒng)器官影響嚴(yán)重、并發(fā)癥繁雜多變。因此在長(zhǎng)期以來(lái)的臨床工作當(dāng)中，對(duì)高壓電燒傷患者的救治成為困擾臨床醫(yī)生的一項(xiàng)亟待攻克的難題。臨床病例中我們觀察到機(jī)體一旦觸電，往往首先會(huì)損傷到血管及神經(jīng)等電阻較小的組織。目前認(rèn)為損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞將會(huì)釋放血管活性物質(zhì)，致使血管通透性增強(qiáng)，大量漿液性滲出使血液濃縮；暴露的內(nèi)皮下膠原纖維和各類(lèi)血細(xì)胞釋放的黏附因子使血管內(nèi)凝血機(jī)制激活，

2、導(dǎo)致血液呈現(xiàn)出高凝狀態(tài)。影響遠(yuǎn)隔器官組織微循環(huán)。損傷后多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子釋放，導(dǎo)致血液呈現(xiàn)出炎性狀態(tài)。
　　環(huán)磷酸腺苷cAMP在細(xì)胞內(nèi)可以承接作用于細(xì)胞膜的各種物理、化學(xué)的刺激信號(hào)，并傳遞致細(xì)胞核，間接對(duì)細(xì)胞的代謝過(guò)程及人體的生命活動(dòng)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，也因此得到“第二信使”的稱(chēng)號(hào)。核因子κB（NF-κB）參與體內(nèi)多種生物活性物質(zhì)基因的表達(dá)調(diào)空，比如白細(xì)胞介素、趨化因子、黏附分子、集落刺激因子等，是基因轉(zhuǎn)錄因子的一種。NF-κB及N

3、F-κB信號(hào)傳導(dǎo)途徑涉及機(jī)體防御機(jī)制中的多個(gè)環(huán)節(jié)。目前，高壓電所致機(jī)體損傷的病理過(guò)程中是否涉及到cAMP及NF-κB很少有人研究。此次試驗(yàn)?zāi)康脑谟谔讲楦邏弘姛齻麑?duì)大鼠血清中NF-κB及cAMP含量的影響及烏司他?。║TI）對(duì)其的干預(yù)作用。
　　方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：采用隨機(jī)數(shù)表，將從河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)的健康成年雄性 SD大鼠180只（體重220-310g，證書(shū)編號(hào)：1411023），以隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法平均分成三組

4、，即假高壓電燒傷組（簡(jiǎn)稱(chēng)為對(duì)照組）、高壓電燒傷組（簡(jiǎn)稱(chēng)為電傷組）、高壓電燒傷后烏司他丁治療組（簡(jiǎn)稱(chēng)為治療組），每組60只。再將每組中60只大鼠隨機(jī)分為高壓電傷前15min、高壓電傷后5min、高壓電傷后1h、高壓電傷后2h、高壓電傷后4h、高壓電傷后8h，6個(gè)不同時(shí)相組，每組10只。各組分別編號(hào)，分籠飼養(yǎng)。
　　2、藥物及大鼠準(zhǔn)備工作：按實(shí)驗(yàn)需求，配比所需麻醉藥品及烏司他丁溶液濃度，將大鼠標(biāo)號(hào)，稱(chēng)重，按體重計(jì)算所需藥品用量，并記錄

5、數(shù)據(jù)。
　　3、制高壓電燒傷大鼠模型：連接實(shí)驗(yàn)電路，檢查實(shí)驗(yàn)電路確定電路各元件連接安全且正確。按計(jì)算量給予實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔內(nèi)注射水合氯醛溶液（即0.3ml/100g）麻醉大鼠，注意麻醉深度。將麻醉成功的大鼠取仰臥位，穩(wěn)定固定在電路絕緣板上，并于左前肢及右后肢分別連接大小相等的1cm×1cm電極夾片，左前肢連接火線(xiàn)為電流入口，右后肢連接零線(xiàn)為電流出口。接通電源后將調(diào)壓器電壓調(diào)整為2kV，閉合電路電閘，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠持續(xù)實(shí)施接觸性高壓電擊，時(shí)

6、長(zhǎng)為3s，斷開(kāi)電閘，關(guān)閉電源。按照實(shí)驗(yàn)要求，對(duì)空白對(duì)照組實(shí)施的操作方法同電傷組，但不接通電源，即給予假電。給予電傷后的高壓電擊組及假高壓電擊組大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水（5ml/kg）。給予電傷后治療組大鼠腹腔內(nèi)注射UTI（2萬(wàn)單位/kg即5ml/kg）。以上各組分別記錄電擊時(shí)時(shí)間點(diǎn)。
　　4、標(biāo)本采集與保存：按實(shí)驗(yàn)要求，先后對(duì)相應(yīng)時(shí)相組內(nèi)大鼠進(jìn)行采血。操作過(guò)程：麻醉大鼠，方法同前。大鼠被麻醉成功后，取仰臥位穩(wěn)定固定在動(dòng)物解剖臺(tái)上；開(kāi)

7、胸，直視下用采血針心尖采血，置于3ml粉頭真空促凝管內(nèi)。每只大鼠可收集全血約6ml。將所取血液樣本靜置約30min，待血清析出后放入離心機(jī)內(nèi)離心，要求：轉(zhuǎn)速：3000轉(zhuǎn)/min時(shí)長(zhǎng)：10min。吸管吸取離心后上層血清，置于2mlEppendorf管中，于-70℃冰箱保存，待檢。
　　5、指標(biāo)檢測(cè)：分別檢測(cè)各組各時(shí)相大鼠血清中 cAMP及 NF-κB濃度；本實(shí)驗(yàn)采用ELISA雙抗夾心法，測(cè)得各指標(biāo)表達(dá)量的OD值，再根據(jù)試劑說(shuō)明由OD

8、值換算得出血清中cAMP及NF-κB濃度。
　　6、數(shù)據(jù)分析：對(duì)本次實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。行兩因素析因設(shè)計(jì)資料的方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，設(shè)定P＜0.05為顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）
　　1.1電傷組大鼠環(huán)磷酸腺苷（ cAMP）總體含量高于空白對(duì)照組（F=264.71, P＜0.05）；電傷后不同時(shí)相

9、組大鼠血清中cAMP含量呈現(xiàn)顯著差異（F＝17.73，P＜0.05），且隨時(shí)間呈現(xiàn)出逐漸增高趨勢(shì)；電傷后各時(shí)相cAMP含量均高于傷前（P＜0.05）。
　　1.2烏司他丁治療組電傷后各時(shí)相大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量低于相應(yīng)時(shí)相的電傷組大鼠（F＝23.93，P＜0.05）；不同時(shí)相大鼠cAMP含量具有顯著差異（F＝34.71，P＜0.05），且隨時(shí)間呈現(xiàn)出逐漸增高趨勢(shì)；電傷后各時(shí)相cAMP含量均高于傷前（P＜0.05）。

10、　　2、核因子κB（NF-κB）
　　2.1電傷組與對(duì)照組比較示大鼠血清 NF-κB總體含量明顯高于空白對(duì)照組（F＝1036.16，P＜0.05）；電傷組大鼠傷后不同時(shí)相血清中NF-κB含量具有顯著差異（F＝64.60，P＜0.05），且隨時(shí)間變化呈現(xiàn)出逐漸增高趨勢(shì)；電傷后各時(shí)相NF-κB含量均高于傷前水平（P＜0.05）。
　　2.2烏司他丁治療組傷后各時(shí)相大鼠血清 NF-κB含量低于相應(yīng)時(shí)相電傷組大鼠（F＝123.54，

11、P＜0.05）；不同時(shí)相大鼠NF-κB含量具有顯著差異（F＝128.89，P＜0.05），且隨時(shí)間變化呈現(xiàn)出逐漸增高趨勢(shì)；電傷后各時(shí)相NF-κB含量均高于傷前（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、高壓電燒傷后大鼠血清中cAMP和NF-κB均有不同程度增高，證明高壓電燒傷可增高血液的炎性狀態(tài)和促使各類(lèi)血細(xì)胞聚集、貼壁，黏附等使血液處于高凝狀態(tài)。
　　2、治療組（UTI）傷后各時(shí)相大鼠血清中cAMP和NF-κB含量較電傷