CD11a-CD18在高壓電燒傷中動(dòng)態(tài)變化及已酮可可堿、烏司他丁干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：由張慶富主任創(chuàng)建的河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院電燒傷微循環(huán)實(shí)驗(yàn)室開展的前期動(dòng)物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)高壓電燒傷后動(dòng)物的深筋膜、胃粘膜、腸粘膜、腸系膜、肝臟、腎臟等存在明顯的微循環(huán)紊亂，不僅表現(xiàn)在局部組織器官，而且還引起遠(yuǎn)隔組織器官的微循環(huán)紊亂。白細(xì)胞活化是燒傷后微循環(huán)障礙的關(guān)鍵改變，其中白細(xì)胞粘附又是其核心步驟；介導(dǎo)白細(xì)胞粘附的主要粘附分子為細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)即CD11a/CD18及巨噬細(xì)胞表

2、面抗原-1(Mac-1)。以往的實(shí)驗(yàn)研究揭示了sICAM-1與CD11b/CD18在高壓電燒傷后微循環(huán)紊亂的機(jī)制，而對淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)即CD11a/CD18的研究還較少，我們本次設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)，就旨在進(jìn)一步觀察和闡述CD11a/CD18在高壓電燒傷后微循環(huán)障礙中的作用機(jī)制。
　　目的：旨在通過觀察高壓電燒傷早期大鼠白細(xì)胞膜上CD11a/CD18陽性表達(dá)的連續(xù)變化，進(jìn)一步探討高壓電擊傷微循環(huán)紊亂的機(jī)制，及己酮可可堿

3、和烏司他丁對整合素家族中CD11a/CD18黏附分子表達(dá)的干預(yù)，為高壓電燒傷的臨床治療提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。
　　方法：
　　1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：成年健康SD大鼠240只，隨機(jī)分成四組，每組各60只，分別為假高壓電燒傷組(對照組)、高壓電燒傷實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組)、高壓電燒傷己酮可可堿(PTX)治療組(PTX治療組)及高壓電燒傷烏司他丁(UTI)治療組(UTI治療組)。每一組又分為6個(gè)不同時(shí)相，即電擊前(T0)、電擊即刻(10min內(nèi))

4、(T1)、傷后1小時(shí)(T2)、2小時(shí)(T3)、4小時(shí)(T4)、8小時(shí)(T5)，每時(shí)相各10只。各組予以編號，分籠飼養(yǎng)。
　　2實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：對大鼠稱重，并按編號記錄在冊。剃除大鼠左上肢、右下肢及胸部被毛。將大鼠置于室溫(24-26℃)和濕度(35-45％RH)相對恒定的實(shí)驗(yàn)室中，保溫，禁食，自由飲水，過夜。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，配置實(shí)驗(yàn)藥品濃度。
　　3模型復(fù)制：電擊前麻醉大鼠，將大鼠逮入塑料瓶式麻醉床，腹腔注射麻藥，按1％戊巴比妥鈉

5、溶液3 ml/kg或40mg/公斤劑量注射。連接變壓器、調(diào)壓器與實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)，將麻醉成功的大鼠放置于高壓輸出電路之間，左上肢為電流入口，右下肢為出口，接通電源調(diào)整變壓器輸出電壓1千伏，電擊三秒鐘后斷電，電極夾接觸局部組織形成三度燒傷創(chuàng)面，大鼠生命體征存在，高壓電燒傷試驗(yàn)動(dòng)物模型復(fù)制成功。對照組給予假電，治療1組在電擊后即刻腹腔注射PTX(50mg/Kg劑量)，治療2組在電擊后即刻腹腔注射UTI(2萬單位/kg)。
　　4標(biāo)本采集與處

6、理：在不同的時(shí)相，將復(fù)制成功高壓電燒傷大鼠模型麻醉后開胸，直視下心臟取血，收集1.0ml全血置于乙二胺四乙酸二鉀(EDTA·K2)抗凝管，混勻。將標(biāo)本去除紅細(xì)胞，標(biāo)記免疫熒光單克隆抗體，制成白細(xì)胞懸液待檢。
　　5指標(biāo)檢測：采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測電燒傷早期不同時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18的陽性表達(dá)(％)。
　　6實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理：應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用完

7、全隨機(jī)的兩因素析因設(shè)計(jì)定量資料的方差分析(ANOVA)，p<0.05為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　白細(xì)胞膜上CD11a/CD18的陽性表達(dá)變化：
　　(1)對照組內(nèi)各時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18陽性表達(dá)無顯著性差異(p>0.05)。
　　(2)實(shí)驗(yàn)組T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18陽性表達(dá)均高于對照組的水平(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組T0、T1、T2、T3、T4時(shí)相CD11a/

8、CD18陽性表達(dá)逐漸增高，到T4時(shí)相表達(dá)最高，T5時(shí)相CD11a/CD18表達(dá)較T4時(shí)相低；組內(nèi)T0、T1、T2、T3、T4各時(shí)相CD11a/CD18表達(dá)比較有顯著性差異(p<0.05)，T4、T5兩時(shí)相CD11a/CD18表達(dá)無顯著性差異(p>0.05)。
　　(3)治療1組T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18陽性表達(dá)均高于對照組的水平(p<0.05)；治療1組T0、T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相CD

9、11a/CD18陽性表達(dá)逐漸增高，到T5時(shí)相表達(dá)最高；組內(nèi)T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相間有顯著性差異(p<0.05)。
　　(4)治療2組T2、T3、T4、T5時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18陽性表達(dá)均高于對照組的水平(p<0.05)，T1時(shí)相與對照組之間無顯著性差異；治療2組T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相CD11a/CD18陽性表達(dá)逐漸增高，到T5時(shí)相表達(dá)最高；組內(nèi)T1和T2、T2和T3、T3和T4時(shí)相間有顯著性差異(p

10、<0.05)；組內(nèi)T4和T5時(shí)相間CD11a/CD18陽性表達(dá)比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　(5)治療1組與實(shí)驗(yàn)組比較：治療1組T2、T3、T4、T5時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18的陽性表達(dá)低于實(shí)驗(yàn)組(p<0.05)；電燒傷組與治療1組T1時(shí)相CD11a/CD18的陽性表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。
　　(6)治療2組與實(shí)驗(yàn)組比較：治療2組T1、T2、T3、T4、T5時(shí)相白細(xì)胞膜上CD11a/CD18的陽性

11、表達(dá)低于實(shí)驗(yàn)組(p<0.05)。
　　(7)治療組1和治療2組比較，兩組各個(gè)時(shí)相CD11a/CD18的陽性表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1高壓電燒傷早期實(shí)驗(yàn)大鼠白細(xì)胞CD11a/CD18顯著增加，增加了白細(xì)胞的黏附，在微循環(huán)障礙中起到重要作用。
　　2高壓電燒傷早期己酮可可堿可下調(diào)白細(xì)胞膜上CD11c/CD18表達(dá)，從而抑制白細(xì)胞黏附，從而緩解微循環(huán)紊亂。
　　3高壓電燒傷早期烏司他丁