烏司他丁對燒傷后免疫功能障礙的干預(yù)效果研究.pdf

1、目的：
　　膿毒癥是嚴(yán)重?zé)齻颊叩闹饕l(fā)癥和首要死亡原因，膿毒癥的發(fā)生發(fā)展與免疫功能障礙密切相關(guān)。失控性炎癥反應(yīng)在燒傷后免疫功能障礙中扮演重要角色。烏司他丁被用于燒(創(chuàng))傷后全身性炎癥反應(yīng)的治療，而烏司他丁對免疫功能的保護(hù)效果如何，尚待研究證實。本研究通過以下兩部分實驗初步探討烏司他丁對燒傷后免疫功能障礙的影響。
　　動物實驗：采用燙傷大鼠模型，觀察烏司他丁對燙傷大鼠脾臟高遷移率族蛋白B1(HMGB1)的表達(dá)和外周血調(diào)節(jié)性

2、T細(xì)胞(Treg，CD4+CD25+)構(gòu)成比的影響：探討烏司他丁對燙傷大鼠輔助性T淋巴細(xì)胞的功能性極化的影響和可能機制；觀察烏司他丁對燙傷大鼠抗原遞呈功能的影響。
　　臨床研究：對燒傷患者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測，明確其外周血Treg細(xì)胞比例的變化規(guī)律，觀察烏司他丁對患者Treg細(xì)胞比例的影響，探討可能機制；觀察燒傷患者輔助性T淋巴細(xì)胞的功能性極化的狀態(tài)，探討烏司他丁對輔助性T淋巴細(xì)胞的功能性極化的影響和可能機制；觀察烏司他丁對燒傷患者抗原遞

3、呈功能的影響。
　　方法：
　　動物實驗：120只Wistar大鼠隨機分為假燙組(S組)、燙傷組(B組)和燙傷+烏司他丁治療組(BU組)，(n=40)。后兩組大鼠制作30％TBSAⅢ度燙傷模型。傷后即刻腹腔注射林格液(40 ml/kg)或烏司他丁(4×104U/kg)+林格液(40 ml/kg)抗休克，創(chuàng)面涂碘伏。假燙組于37℃水浴中12 s行假燙，傷后即刻腹腔注射林格液(40 ml/kg)。于傷后1、3、5、7d四個時間點

4、，S組和B組腹腔注射4mL林格液，BU組給予4×104U/kg烏司他丁+4mL林格液。各組分別于傷后1、3、5、7、14d腹主動脈無菌采血，并分離獲取大鼠脾臟組織。Western blotting檢測大鼠脾組織HMGB1的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測血液中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+Treg)比例、單核細(xì)胞Ia抗原表達(dá)率，ELISA檢測血清中IL-4和IFN-γ水平。
　　臨床研究：燒傷面積≥30％TBSA的患者30

5、例，隨機分為常規(guī)治療組(13例)和烏司他丁+常規(guī)治療組治療(17例)。常規(guī)治療包括補液抗休克、抗生素抗感染、創(chuàng)面換藥、手術(shù)切痂植皮、營養(yǎng)支持治療等。烏司他丁治療組除常規(guī)治療外，8×105U烏司他丁溶于500ml0.9％生理鹽水注射液中靜脈滴注，2次/日，連續(xù)7日。分別于治療前及治療后1d、3d、5d、7d、14d采外周靜脈血，另取20例健康體檢者外周靜脈血作為對照。流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中Treg細(xì)胞比例、CD14+單核細(xì)胞HLA-DR抗

6、原表達(dá)率，ELISA檢測血清中IL-4和IFN-γ水平。
　　結(jié)果：
　　動物實驗：
　　1.與假燙組相應(yīng)時間點比較，燙傷組大鼠脾組織HMGB1水平在傷后1d～7d顯著升高(P<0.01)，傷后3d時表達(dá)量最高。烏司他丁治療后1d～7dHMGB1水平有不同程度的降低，在治療后5d表達(dá)量最低。
　　2.與假燙組相應(yīng)時間點比較，燙傷大鼠外周血Treg細(xì)胞比例在傷后逐漸上升，傷后3d時達(dá)峰值(P<0.01)，烏司他丁治

7、療后燙傷大鼠外周血Treg細(xì)胞的比例降低。
　　3.燙傷組大鼠1d～7d血清中IFN-γ濃度明顯低于假燙組，而IL-4明顯高于假燙組，燙傷組大鼠的Th1/Th2發(fā)生了Th2方向的漂移。經(jīng)烏司他丁治療后，傷后血清中的IL-4明顯減少，而IFN-γ則明顯增加。
　　4.假燙組大鼠單核細(xì)胞Ia抗原陽性率始終維持在較高水平，燙傷后即有明顯的降低，傷后1d即開始緩慢升高，但是在實驗全程仍然顯著低于假燙組大鼠(P<0.05或P<0.01

8、)。烏司他丁治療后燙傷組大鼠單核細(xì)胞Ia抗原陽性率升高。
　　臨床研究：
　　1.燒傷后患者外周血中Treg細(xì)胞比例于傷后1d即升高，在整個時相段內(nèi)均高于健康對照組(P<0.01)。相對于常規(guī)治療組，烏司他丁治療Treg胞比例下降。
　　2.健康體檢者血清中IL-4和IFN-γ濃度較低，常規(guī)治療組患者血清中IL-4濃度較健康對照組明顯增高(P<0.01)，而IFN-γ濃度則顯著降低(P<0.05或P<0.01)。相對于

9、常規(guī)治療組，烏司他丁治療后患者血清中的IL-4濃度明顯降低(P<0.05或P<0.01)，傷后血清IFN-γ濃度則明顯增高(P<0.05或P<0.01)。
　　3.嚴(yán)重?zé)齻颊咄庵苎狢D14+單核細(xì)胞HLA-DR抗原表達(dá)率在全部觀測時點較健康對照組顯著降低(P<0.01)，而烏司他丁+常規(guī)治療后有明顯改善(P<0.05或P<0.01)，HLA-DR抗原表達(dá)率持續(xù)升高，在第14天時改善最為明顯。
　　結(jié)論：動物和臨床試驗表明，