γδT細(xì)胞和CD4+CD25+T細(xì)胞在哮喘大鼠發(fā)病的初步探討及地塞米松的干預(yù)作用.pdf

1、目的：探討調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在支氣管哮喘大鼠發(fā)病及發(fā)展中的作用，γδ T細(xì)胞和Foxp3在哮喘大鼠肺組織中的表達(dá)及地塞米松干預(yù)對(duì)其的影響。 方法： (1)用雄性Wistar大鼠(200-250g)，標(biāo)準(zhǔn)制模以大鼠出現(xiàn)的癥狀及病理變化作為判斷模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。(2)將選定的大鼠隨機(jī)分為A正常對(duì)照組，B哮喘組，C地塞米松干預(yù)組。觀察病理形態(tài)并免疫組化檢測肺組織中γδ T細(xì)胞、Foxp3及TGF-β的表達(dá)，以及酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測

2、肺泡灌洗液(BALF)中相關(guān)細(xì)胞因子的含量及灌洗液細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。 結(jié)果：(1)B組大鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù)(8.57±0.27×10<'5>/ml)明顯高于A組(2.92±0.17×10<'5>/ml)，P<0.01；C組(3.30±0.29×10<'5>/ml)較B組明顯下降，P<0.01。細(xì)胞分類百分比，B組嗜酸性粒細(xì)胞(32.72±2.61％)、淋巴細(xì)胞(9.52±0.48％)和中性粒細(xì)胞(15.30±1.22％)較A組嗜

3、酸性粒細(xì)胞(0.47±0.21％)、淋巴細(xì)胞(1.30±0.21％)和中性粒細(xì)胞(2.68±0.51％)明顯增加(P<0.01)。C組炎細(xì)胞百分比亦明顯下降，即嗜酸性粒細(xì)胞(3.52±0.82％)、淋巴細(xì)胞(2.40±0.28％)和中性粒細(xì)胞(8.37±1.19％)。(2)BALF中各細(xì)胞因子含量，B組Th2細(xì)胞因子IL-4(71.05±3.91)較A組(14.53±3.35)顯著升高(P<0.001)；Th1細(xì)胞因子IFN-γ(17.

4、67±3.53)亦高于A組(10.84±2.81)，(P<0.001)，但I(xiàn)FN-γ增高的幅度明顯小于IL-4，即表現(xiàn)為Th2優(yōu)勢；肺組織中TGF-β表達(dá)B組(0.27±0.02)高于A組(0.18±0.02)，(P<0.001)。C組IL-4(24.20±3.16)較B組明顯下降(P<0.001)，但仍高于A組(P<0.01)；IFN-γ(12.06±3.06)與A組差別無顯著性；肺組織中TGF-β表達(dá)亦下降(0.1927±0.017

5、0)，但仍較正常組高。(3)肺組織γδ T細(xì)胞、Foxp3表達(dá)：γδ T細(xì)胞的表達(dá)B組(0.3376±0.0256)高于A組(0.2187±0.0119)，(P<0.001)；Foxp3表達(dá)B組(0.3567±0.0534)高于A組(0.2143±0.0272)，(P<0.001)。C組γδ T細(xì)胞(0.2639±0.0209)、Foxp3(0.2689±0.0422)與B組相比明顯下降(P<0.001)，但仍未降至正常水平(P<0.0

6、5)。 結(jié)論：(1)用腹腔注射卵白蛋白(OVA)抗原液致敏大鼠，再用抗原液霧化復(fù)制哮喘大鼠模型，經(jīng)大鼠出現(xiàn)的癥狀及肺組織病理檢測證實(shí)大鼠模型復(fù)制成功，可用于實(shí)驗(yàn)研究。 (2)支氣管哮喘大鼠肺泡灌洗液中IL-4顯著升高，IFN-γ/IL-4比值顯著降低，說明IFN-γ含量相對(duì)不足，肺組織TGF-β表達(dá)增多。從而引起IgE升高，肺組織炎癥細(xì)胞聚集，氣道重構(gòu)等，誘發(fā)哮喘。 (3)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展中有重

7、要作用，免疫失衡是哮喘發(fā)病的重要因素。γδ T細(xì)胞及CD4+CD25+Tr細(xì)胞參與哮喘的發(fā)病。兩種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可能是引起Th1/Th2失衡，Th2型細(xì)胞因子升高，從而使局部炎癥細(xì)胞浸潤，氣道炎癥加重的原因。 (4)地塞米松作為一種抗炎藥物被廣泛地應(yīng)用于哮喘及其它過敏性疾病的治療，該類藥物在體內(nèi)可以抑制T細(xì)胞的活化和Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)。其作用可能是降低哮喘大鼠肺組織γδ T及Foxp3的表達(dá)，從而使減少Th2優(yōu)勢應(yīng)答，其細(xì)胞因