草分枝桿菌對(duì)哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和TLR4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)測(cè)定哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞／CD4+T細(xì)胞百分率及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上的TLR4表達(dá)的變化；觀察糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及TLR4的影響；評(píng)估早期應(yīng)用草分枝桿菌干預(yù)對(duì)哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及TLR4的表達(dá)的影響,探討草分枝桿菌的免疫調(diào)節(jié)作用,為尋找新的途徑更好地預(yù)防和治療哮喘提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:將雌性BALB／c小鼠40只,采用隨機(jī)數(shù)字表法分

2、為四組:正常對(duì)照組(NS)、哮喘組(OVA)、哮喘地塞米松治療組(OVA／GC)和哮喘草分枝桿菌治療組(OVA／Utilin),,于實(shí)驗(yàn)第0 d和第14d OVA組、OVA／GC組和OVA／Utilin組小鼠采用腹腔注射卵白蛋白(OVA)和氫氧化鋁(Al(OH)3)混合液致敏；從實(shí)驗(yàn)第21d起開(kāi)始,以2％OVA每天霧化30min,連續(xù)霧化5d激發(fā)制備哮喘模型,OVA／GC組于每次激發(fā)前30min腹腔注射地塞米松(1mg／Kg),OVA／

3、Uilin組于第一次致敏前2周腹腔注射草分枝桿菌F.U.36注射液(烏體林斯)0.57ug隔天一次共三次,NS組則給予生理鹽水腹腔注射和霧化做對(duì)照。所有小鼠于末次激發(fā)后24 h引頸處死。取小鼠左肺組織作病理切片,蘇木素-伊紅(HE)觀察炎癥改變；取小鼠脾臟于不銹鋼細(xì)胞篩上研磨、淋巴細(xì)胞分離液分離制備脾組織單個(gè)核細(xì)胞懸液,利用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)各組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分率及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上的

4、TLR4平均熒光強(qiáng)度。
　　 結(jié)果:1)小鼠哮喘模型建立成功模型組小鼠在霧化過(guò)程中出現(xiàn)了明顯的類似人類哮喘急性發(fā)作癥狀:呼吸加快加深、前肢縮抬、二便失禁等表現(xiàn)。病理表現(xiàn)為:NS組氣道上皮無(wú)增厚,氣道及血管周圍未見(jiàn)炎癥表現(xiàn)；OVA組氣道及血管周圍均可見(jiàn)明顯以嗜酸性粒細(xì)胞增多為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分細(xì)支氣管上皮細(xì)胞脫落不完整；OVA／GC組和OVA／Ulin組炎癥改變明顯減輕。2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:(1)CD4+T淋巴細(xì)胞亞群

5、中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分率OVA組顯著低于NS組,OVA／GC組和OVA／Utilin組較OVA組小鼠明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),而OVA／GC組和OVA／Utilin組CD4+T淋巴細(xì)胞亞群CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分率略高于NS組小鼠,OVA／Utilin組百分率接近OVA／GC組小鼠,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。(2)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上表達(dá)的TLR4平均熒光強(qiáng)度值OVA組

6、較NS組降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；OVA／GC組和OVA／Utilin組較OVA組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；OVA／GC組較OVA／Utilin組稍低,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)各組小鼠脾單個(gè)核細(xì)胞CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上表達(dá)的TLR4平均熒光強(qiáng)度值與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞百分率無(wú)相關(guān)性。
　　 結(jié)論:1)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞參與了哮喘免疫平衡調(diào)節(jié),其數(shù)量

7、降低和功能障礙可導(dǎo)致和加重哮喘的癥狀。OVA不能改變TLR4的表達(dá),CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上的TLR4對(duì)OVA誘發(fā)的哮喘小鼠的發(fā)病沒(méi)有作用。2)糖皮質(zhì)激素可促進(jìn)哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量的增加及TLR4的表達(dá),可能是其治療哮喘的免疫學(xué)機(jī)制之一。3)早期應(yīng)用草分枝桿菌干預(yù)性治療,可通過(guò)促進(jìn)CD4+CD25+細(xì)胞上的TLR4的表達(dá)和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目的增加,糾正了機(jī)體的免疫紊亂而發(fā)揮其治療作用,有可能