人CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與免疫衰老及腫瘤之間的關(guān)系.pdf

1、人類調(diào)節(jié)性T細(xì)胞包括CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+regulatory Tcells，簡(jiǎn)稱CD4+CD25+Treg)、Tr1和Th3等多種亞型，但目前最引人注目且研究較充分的是CD4+CD25+Treg細(xì)胞。該群細(xì)胞表面還表達(dá)CD45RBlow、CD5high、CD44high、ICAM-1high和LFA-1hihg等，但都不具有特異性。forkhead box p3基因編碼的一種核蛋白--FoxP3是CD4+C

2、D25+Treg細(xì)胞分化發(fā)育和功能維持的重要調(diào)控基因，但是CD25-T細(xì)胞活化后也可短暫表達(dá)FoxP3，因此并不是所有FoxP3陽(yáng)性細(xì)胞都是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。近來(lái)發(fā)現(xiàn)借助CD127(IL-7受體)可以識(shí)別CD4+CD25+Treg細(xì)胞與活化的T細(xì)胞：高或中等強(qiáng)度表達(dá)CD127的CD4+CD25+T細(xì)胞為活化的T細(xì)胞，低表達(dá)CD127的CD4+CD25+T細(xì)胞才是真正的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)CDl27與Foxp3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。這些新發(fā)現(xiàn)為

3、今后進(jìn)一步研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與機(jī)體整體免疫功能之間的關(guān)系提供了良好依據(jù)。 CD4+CD25+Treg細(xì)胞具有免疫無(wú)能性和免疫抑制性兩大功能特征，即在各種刺激原(如高濃度IL-2、抗CD3單抗)作用下，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞既不增殖也不分泌IL-2、INF-γ等細(xì)胞因子，但經(jīng)T淋巴細(xì)胞受體(TCR)介導(dǎo)信號(hào)刺激活化后，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠抑制CD4+CD25-效應(yīng)性T細(xì)胞(T-resp)和CD8+T細(xì)胞的活化、增殖及其細(xì)胞因子的產(chǎn)生，抑制T-re

4、sp、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。免疫衰老(immnnosenscence)是機(jī)體的免疫功能隨年齡增長(zhǎng)而不斷下降。老人主要死于感染性疾病、惡性腫瘤和難以控制的感染，這些疾病均與免疫衰老有關(guān)。有研究證實(shí)外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞隨年齡增長(zhǎng)而升高。因此CD4+D25+Treg細(xì)胞可能與免疫衰老、腫瘤、感染、移植和移植物抗宿主病等密切相關(guān)。 目的： (1)探索可用于檢測(cè)人外周

5、血中CD4+D25+Treg細(xì)胞的最佳標(biāo)記物，檢測(cè)外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+D25+CD127lowT細(xì)胞，并以經(jīng)典指標(biāo)CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+為標(biāo)準(zhǔn)，分析和比較CD4+D25+CD127low作為識(shí)別CD4+CD25+Treg細(xì)胞免疫標(biāo)記的可行性及其優(yōu)勢(shì)； (2)探討CD4+CD25+Treg細(xì)胞與免疫衰老及老年腫瘤之間的關(guān)系； (3)體

6、外分選老年腫瘤患者CD4+CD25+T細(xì)胞，檢測(cè)其表型特征，并進(jìn)行體外功能測(cè)定。 (4)檢測(cè)不同治療階段急性髓細(xì)胞白血病患者外周血的CD4+CD25+Treg細(xì)胞，探討其在白血病治療過(guò)程中的意義。 方法： (1)采用雙色或三色直接免疫熒光素法標(biāo)記細(xì)胞抗原，包括細(xì)胞膜表面和胞核抗原，如：CD4、CD25、CD127、FoxP3等，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)； (2)應(yīng)用FACS分選CD4+CD25+CD127low、CD

7、4+CD25-T細(xì)胞，分選后測(cè)定細(xì)胞純度； (3)分別培養(yǎng)分選純化后的淋巴細(xì)胞，觀察CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞在抗CD3單抗、抗CD28單抗的刺激并有高濃度IL-2存在的情況下能否增殖； (4)進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，比色法測(cè)定CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞的抑制功能。 結(jié)果： (1)健康人和腫瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+

8、CD127lowT細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞百分比分別為(1.769±0.682)％和(2.958±1.392)％：(2.905±1.772)％和(5.128±2.227)％以及(5.396±1.306)％和(7.175±2.565)％。三者呈現(xiàn)相同的趨勢(shì)，即腫瘤患者組>健康人組，且三者之間呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。 (2)以外周血中CD4+T細(xì)胞設(shè)門(mén)，健康青年人(青年組)、健康老年人(老人組)和老年腫瘤患者(老年腫瘤組)CD4+

9、CD25highT細(xì)胞分別為(1.390±0.412)％、(1.729±0.247)％和(2.150±0.769)％，CD4+CD25+FoxP3+細(xì)胞分別為(1.180±0.343)％、(2.477±0.400)％和(4.980±2.177)％，CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞分別為(5.213±0.942)％、(6.186±1.196)％和(7.194±1.538)％。 上述三個(gè)指標(biāo)呈現(xiàn)相同的變化規(guī)律，即老年腫瘤組最

10、高，老人組次之，青年組最低。三組人群中三個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平均具有顯著性差異，且三個(gè)指標(biāo)之間也呈正相關(guān)(P<0.05)。 (3)經(jīng)300U/mL的IL-2和抗CD3、抗CD28單抗刺激后，老年腫瘤患者外周血中的CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞明顯擴(kuò)增；在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中，新鮮分選和擴(kuò)增后的CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞均可抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖。 (4)急性髓細(xì)胞白血病患者腫瘤負(fù)荷組和緩解3年

11、內(nèi)組外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞均高于健康人組(p<0.05)，而緩解3年以上組外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞與健康人組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： (1)采用最新的CD4+CD25+CD127low三標(biāo)記法可以幫助識(shí)別CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T細(xì)胞，提高CD4+CD25+Treg細(xì)胞的可檢出數(shù)量，而且不影響細(xì)胞活性度，是用來(lái)檢測(cè)和純化分選CD4+CD25+Treg

12、細(xì)胞更理想的指標(biāo)。 (2)老人和老年腫瘤患者外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞明顯升高，新鮮分選和培養(yǎng)擴(kuò)增后的老年腫瘤患者外周血Treg細(xì)胞均具有免疫無(wú)能和免疫抑制功能，CD4+CD25+Treg細(xì)胞過(guò)量累積可能與免疫衰老及老年腫瘤密切相關(guān)，利用各種方法去除CD4+CD25+Treg細(xì)胞也可能是提高老人機(jī)體免疫力和治療腫瘤的一條新途徑。 (3)與正常人相比，急性髓細(xì)胞白血病患者除緩解3年以上組外，其他各組均存在CD4