芳香烴受體在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞和CCR6+CD4+T細(xì)胞-CD4+CD25+T細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：近來研究表明芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,AhR)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者(Rheumatoid arthritis,RA)關(guān)節(jié)滑膜組織中高表達(dá),同時(shí)AhR還對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(Collagen-induced arthritis,CIA)外周血中輔助性T淋巴細(xì)胞（Helper T lymphocytes,Th)17及調(diào)節(jié)性 T淋巴細(xì)胞（Regulatory T lymphocytes,Tregs)的增

2、殖和功能具有調(diào)節(jié)作用,而Th17及Tregs細(xì)胞水平與RA的發(fā)病密切相關(guān)。本研究欲通過檢測RA患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)內(nèi)芳香烴受體(AhR)及其下游應(yīng)答基因 CYP1A1的表達(dá)水平,及 CCR6+CD4+T、CD4+CD25+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞所占比例,來探討AhR在RA發(fā)病機(jī)制中的意義。
　　方法：收集35名RA患者及20名健康對照者外周血,采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法測定PBMCs AhR mRNA

3、和CYP1A1 mRNA的相對表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)測定AhR陽性細(xì)胞占PBMCs比例,并分析來氟米特(LEF)治療對AhR、CYP1A1表達(dá)的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)測定33例RA患者及14例健康對照者外周血CCR6+CD4+T細(xì)胞及CD4+CD25+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例。同時(shí),收集、計(jì)算RA患者一般臨床資料:年齡、性別、病程、疼痛關(guān)節(jié)數(shù)(TJC)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)(SJC)、DAS28評分、紅細(xì)胞沉降率

4、(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽(抗-CCP)抗體,并分析AhR、CYP1A1的表達(dá)與RA患者臨床指標(biāo)的關(guān)系。
　　結(jié)果：① RA患者非LEF治療組PBMCs AhR mRNA相對表達(dá)高于健康對照組[(3.61±1.65)與(2.00±1.27),P=0.002],AhR陽性細(xì)胞比例高于健康對照組[(34.21±11.30)％與(18.83±7.32)%,P<0.01];LEF治療組與非LEF治療組AhR mRNA相

5、對表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(3.83±1.62)與(3.61±1.65),P=0.670],AhR陽性細(xì)胞比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(36.69±10.61)%與(34.21±11.30)%,P=0.462]。② RA患者非 LEF治療組 PBMCs內(nèi) CYP1A1 mRNA相對表達(dá)高于健康對照組[1.33(0.08,7.86)與(0.62±0.29),z=-3.922,P<0.01];LEF治療組與非LEF治療組 CYP1A1 mRNA相對

6、表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(2.62±2.08)與1.33(0.08,7.86),z=-0.133,P=0.894]。③ RA患者組外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)中CCR6+CD4+T細(xì)胞所占比例為(10.75±2.92)%,高于健康對照組[(4.96±2.28)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.581,P<0.01)。④ RA患者組內(nèi)外周血CCR6+CD4+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例為(46.02±14.68)%,且高于RA組CCR6-CD

7、4+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例[(21.62±6.94)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-6.432,P<0.01);高于RA組 PBMCs中 AhR陽性細(xì)胞比例[(34.22±10.33)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.776,P<0.01);也高于健康對照組[(23.18±5.62)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-4.909,P<0.01)。⑤ RA患者組外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中CD4+CD25+T細(xì)胞所占比例為(0.97±0.

8、42)%,低于健康對照組[(2.27±0.47)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.39,P<0.01)。⑥ RA患者組內(nèi)外周血CD4+CD25+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例為[17.90(6.10,80.10)]%,低于RA組CD4+CD25-T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例[(47.41±20.48)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-5.322,P<0.01),低于 RA組PBMCs中AhR陽性細(xì)胞比例[(34.22±10.33)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義(t=-4.187,P<0.01),也低于健康對照組[(52.49±19.18)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-4.362,P<0.01)。⑦正常對照組外周血 CD4+CD25+T細(xì)胞中 AhR陽性細(xì)胞比例為(52.49±19.18)%,高于 CCR6+CD4+T細(xì)胞中(23.18±5.62)%,且都高于 PBMCs細(xì)胞中(18.06±7.80)%,3組間AhR陽性細(xì)胞比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=24.03,P<0.01)。⑧ RA患

10、者組外周血 CCR6+CD4+T細(xì)胞中 AhR陽性細(xì)胞比例為(46.02±14.68)%,高于PBMCs細(xì)胞中(34.22±10.33)%,且都高于CD4+CD25+T細(xì)胞中[17.90(6.10,80.10)]%,3組間 AhR陽性細(xì)胞比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=38.29,P<0.01)。⑨相關(guān)性分析:RA患者PBMCs AhR mRNA相對表達(dá)、AhR陽性細(xì)胞比例和CYP1A1 mRNA相對表達(dá)與血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP

11、)、抗環(huán)瓜氨酸肽(抗-CCP)抗體、DAS28評分、疾病病程均無相關(guān)性(P值均>0.05);RA患者組外周血CCR6+CD4+T、CD4+CD25+T細(xì)胞中AhR陽性細(xì)胞比例與紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽(抗-CCP)抗體、DAS28評分、疾病病程均無相關(guān)性(P值均>0.05)。
　　結(jié)論：① RA患者PBMCs內(nèi)AhR高表達(dá),且CYP1A1 mRNA高表達(dá),AhR受體上調(diào)和激活可能參與RA的發(fā)病。②