[Gly14]-Humanin在高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　研究[Gly14]-Humanin（HNG）在高糖（Highglucose,HG）誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）凋亡中的作用，并初步探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分：以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)高糖作用建立細(xì)胞凋亡模型。采用MTT法檢測(cè)不同濃度HG作用72h后細(xì)胞活力的改變，及預(yù)處理HNG1μM后對(duì)細(xì)胞活力的影響；we

2、sternblot法測(cè)定Bax、bcl-2、PARP的表達(dá)水平；Hoechst33342染色觀察細(xì)胞DNA染色質(zhì)形態(tài)變化。第二部分：采用DCFH-DA標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的改變。
　　結(jié)果：
　　第一部分：MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HG50mM刺激HUVEC72h后細(xì)胞活力明顯下降（P<0.01），與單獨(dú)HG50mM組相比，1μMHNG預(yù)處理組細(xì)胞活力明顯增高（P<0.05）。Hoechst33342染色熒光顯微

3、鏡觀察結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HG50mM組細(xì)胞核染色增強(qiáng)，細(xì)胞核變形明顯，凋亡細(xì)胞數(shù)量增加（P<0.001），與單獨(dú)HG50mM組相比，1μMHNG預(yù)處理組細(xì)胞核染色較弱，細(xì)胞核變形不明顯，凋亡細(xì)胞數(shù)量減少（P<0.05）。同樣，westernblot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HG組細(xì)胞促凋亡基因Bax表達(dá)顯著增加，抑制凋亡基因bcl-2表達(dá)顯著減少，其比值Bax/bcl-2增加（P<0.05），剪切的DNA修復(fù)酶（polyADP-ri

4、bosepolymerase,PARP）增加（P<0.01）；與單獨(dú)HG50mM組相比，1μMHNG預(yù)處理組Bax/bcl-2減小（P<0.05），剪切的PARP減少（P<0.05）。第二部分：采用DCFH-DA標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HG50mM組細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著增多（P<0.01）；與單獨(dú)HG50mM組相比，1μMHNG預(yù)處理組細(xì)胞內(nèi)ROS含量減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　HNG