硫化氫抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、[研究背景]
　　 近年來(lái)，被稱為繼心血管疾病和腫瘤性疾病之后“第三大非傳染性疾病”的糖尿病，已成為嚴(yán)重威脅人類健康、給社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)的世界性公共衛(wèi)生問(wèn)題。作為嚴(yán)重危害人類健康的慢性疾病，糖尿病血管并發(fā)癥是糖尿病患者致殘與致死的主要原因，大血管病變直接影響糖尿病患者的預(yù)后與生存。動(dòng)脈粥樣硬化(arteriosclerosis，AS)是大血管病變的病理基礎(chǔ)，研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮功能紊亂是AS病理變化的早期表現(xiàn)之一，也是AS產(chǎn)生的重要

2、初始階段。近年的研究發(fā)現(xiàn)曾被人們認(rèn)為有毒、具有“臭雞蛋”氣味的硫化氫(hydrogensulfide，H2S)是繼一氧化氮(nitrogenoxide，NO)和一氧化碳(carbonmonoxide，CO)的第三種氣體信號(hào)分子。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，H2S發(fā)揮著廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，在多個(gè)系統(tǒng)、多種疾病的發(fā)生中均有重要的生理作用和病理生理意義。
　　 [目的]
　　 本實(shí)驗(yàn)以高濃度葡萄糖下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)為模型，通過(guò)對(duì)細(xì)

3、胞凋亡率、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及H2S生成量的觀察，研究硫化氫對(duì)高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響，并初步探討其機(jī)制。
　　 [方法]
　　 將購(gòu)自ATCC的HUVECs接種于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到70％～80％時(shí)，將HUVECs分為4組:A組為正常糖濃度組(5.5mmol/L)，B組為高糖組(25mmol/L)，C組為高糖(25mmol/L)+硫氫化鈉(50μ

4、mol/L)組，D組為正常糖濃度（5.5mmol/L）+硫氫化鈉(50μmol/L)組，處理48h后，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)H2S的含量，MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率，WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和Cleavedcaspase-3的表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 ①與A組相比，B組H2S生成量明顯減少(P＜0.05)，與B組相比，C組H2S生成量明顯增多(P＜0.05)。
　　 ②與A組相比，B組的細(xì)胞

5、存活率明顯減少(P＜0.05)，而C的細(xì)胞存活率較B組顯著升高（P＜0.05）。
　　 ③與A組相比，B組Bax表達(dá)顯著升高(P＜0.05)，Bcl-2的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)而Caspase-3活性明顯增強(qiáng)(P＜0.05);與B組相比，C組Bax水平顯著降低(P＜0.05)，Bcl-2水平顯著升高(P＜0.05)，Caspase-3活性顯著下降(P＜0.05)。與A組相比，D組各指標(biāo)表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。