槲皮素對高糖誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞舒縮功能損傷的保護作用.pdf

1、目的:糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種常見多發(fā)的代謝性內(nèi)分泌疾病，DM的各種急、慢性并發(fā)癥嚴重威脅著人類的健康。其中，大血管病變是DM最主要的并發(fā)癥，是DM其他慢性并發(fā)癥的發(fā)病基礎。其發(fā)病機理與血管內(nèi)皮細胞損傷、血小板激活、凝血及纖溶異常有關。其主要的病理改變?yōu)閯用}粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)，內(nèi)皮細胞損傷是DM大血管病變的最早期的重要表現(xiàn)，也是AS發(fā)展的始動因子。血管內(nèi)皮細胞通過合成和釋放多

2、種生物活性物質而發(fā)揮調節(jié)血管張力、維持血液流動、防止血栓形成等重要功能，其中一氧化氮(NitricOxide，NO)和內(nèi)皮素(Endothelin-1，ET-1)分別為重要的血管舒張因子及收縮因子，在維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定方面起著重要作用。NO具有松弛血管平滑肌、抗血小板聚集的作用，可減輕氧自由基造成的血管內(nèi)皮功能障礙。ET-1水平升高可引起血管痙攣，血管平滑肌細胞增殖，血小板黏附、聚集、促進血栓形成，誘發(fā)AS。生理情況下，NO與ET-1處于

3、一種平衡狀態(tài)，使得血管維持一定的張力。在高糖環(huán)境下，血管內(nèi)皮屏障功能被破壞，從抗血栓為主的生理狀態(tài)進入促血栓形成為主的病理狀態(tài)。因此，保護血管內(nèi)皮細胞免受損傷，增強血管內(nèi)皮細胞對有害因子的抵抗力和耐受力，對預防糖尿病大血管病變有重要意義。目前研發(fā)中藥治療糖尿病的并發(fā)癥引起了越來越多學者的關注。據(jù)研究顯示，黃酮類化合物具有抗動脈粥樣硬化、降糖、降壓、抗氧化應激、抑制醛糖還原酶、抑制非酶糖基化等藥理作用。槲皮素(Quercetin，Qu)屬

4、于黃酮類中抗氧化還原反應最強的物質之一。有資料顯示，Qu可以有效地發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用，但機理尚未十分明確。本實驗以不同濃度的Qu作用于體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)，觀察HUVECs的形態(tài)、活力、NO及ET-1的分泌，以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric OxideSynthase，eNOS)及ET-1的蛋白表達的變化，

5、研究Qu對高糖誘導HUVECs舒縮功能損傷的保護作用，進一步探究該藥治療糖尿病大血管病變的可能作用機制。
　　方法:體外培養(yǎng)HUVECs細胞，選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)期細胞入組。實驗分6組:①正常對照組（葡萄糖濃度為5.5 mmol/L）;②高糖損傷組(葡萄糖濃度為30mmol/L);③高滲對照組（5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇）;④低劑量Qu組（25μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖）;⑤中劑量Qu組（

6、50μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖）;⑥高劑量Qu組(100μmol/LQu+30mmol/L葡萄糖);各藥物組均在高糖處理前2小時分別加入藥物，加入藥物后分別培養(yǎng)12，24，48小時后，觀察HUVECs的形態(tài)，MTT法檢測細胞生存活力，以硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)HUVECs細胞上清中NO的含量，采用放射免疫分析法檢測HUVECs培養(yǎng)上清液中ET-1含量;Western blot法檢測HUVECs培養(yǎng)細胞中ET-1蛋白表達和eNO

7、S蛋白表達以及磷酸化程度的變化。
　　結果:
　　1同一時間段，高糖組細胞活性明顯低于正常對照組，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。甘露醇組細胞活性與正常對照組相比無明顯變化。高糖組細胞活性在48小時內(nèi)隨培養(yǎng)時間的延長逐漸下降（P＜0.05）。各濃度的Qu干預組細胞活性均較高糖組升高，且均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且成時間及劑量依賴性。
　　2與正常對照組相比，高糖組HUVECs培養(yǎng)上清NO分泌量及細胞中p-eNOS蛋

8、白表達明顯下降，且均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，但總eNOS蛋白表達無明顯變化(P＞0.05)，而ET-1的分泌量及蛋白表達顯著升高，且均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);與高糖對照組相比，經(jīng)Qu干預后，HUVECs培養(yǎng)上清NO分泌量及細胞中p-eNOS蛋白表達明顯回升，均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，ET-1的分泌量及蛋白表達顯著下降，均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），且呈劑量依賴性。
　　結論:
　　1高糖可誘導HUVECs