人參皂苷Rd對人臍靜脈內(nèi)皮細胞缺氧損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:研究人參皂苷Rd對缺氧損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)的保護作用，并探討其作用機制，為開發(fā)治療心腦血管疾病藥物提供理論依據(jù)。
　　方法:培養(yǎng)HUVEC，實驗分為7組:空白對照組，溶媒對照組，缺氧損傷組（模型組），人參皂苷Rd不同濃度組(25μ mol/L、125μ mol/L、625μ mol/L)，陽性藥組(Nimodipine50μmol/L)，藥物干預(yù)24h后，除空白對照組和溶媒對照組外，其余組用8mmol/L連二

2、亞硫酸鈉(Na2S2O4)誘導HUVEC損傷4小時，進行相關(guān)指標檢測:1.倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學。2.線粒體琥珀酸脫氫酶(MTT)法檢測細胞存活率。3.光化學法檢測培養(yǎng)液LDH外漏濃度。4.硫代巴比妥酸法測定細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量及黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物岐化酶(SOD)活力。5.流式細胞術(shù)測定細胞內(nèi)游離鈣([Ca2+]i)濃度。6.AO/EB雙染法檢測細胞凋亡和死亡。7.免疫細胞化學法測定細胞色素C含量。8.R

3、ealtime-PCR測定凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax mRNA的表達。
　　結(jié)果:8 mmol/L的Na2S2O4損傷4小時可明顯降低HUVEC的增殖活性，增加LDH的外漏，增高細胞內(nèi)[Ca2+]i水平，提高MDA含量，降低SOD活性，增加細胞色素C的釋放，引起細胞凋亡，增高Bax mRNA表達量及降低Bcl-2 mRNA表達量，且與空白對照組比較有顯著性差異(p＜0.01)，表明HUVEC缺氧損傷模型復制成功;不同濃度的人參

4、皂苷Rd可提高HUVEC的MTT吸光度值，減少LDH的外漏，降低細胞內(nèi)[Ca2+]i水平，MDA產(chǎn)生減少，SOD活性增強，減少細胞色素C的釋放，降低Bax mRNA、增高Bcl-2mRNA表達量，抑制細胞凋亡，與模型組比較差異有顯著性差異(p＜0.01或p＜0.05)。
　　結(jié)論:人參皂苷Rd對缺氧損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細胞具有保護作用，能提高內(nèi)皮細胞的存活率及改善其形態(tài)，其作用機制可能包括:(1)降低細胞內(nèi)[Ca2+]i水平，(2)