HSP22對(duì)缺氧-復(fù)氧損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　 研究熱休克蛋822(Heat shock protein22，HSP22)對(duì)缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation H/R)損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的保護(hù)作用，并探討其機(jī)制。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、脂質(zhì)體(Lipo)組、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)照組(空白質(zhì)粒組)和目的基因轉(zhuǎn)染組(RNAi組)4組，Lipo組在HUVECs中僅加入Lipo，空白質(zhì)粒組在HUVECs中加

2、入Lipo和空質(zhì)粒(pGcsi-U6/Neo/GFp/shRNA)，RNAi組在HUVECs中加入Lipo和目的基因(pGcsi-U6/Neo/GFp/shRNA/HSP22)。經(jīng)G418篩選各組細(xì)胞后，分別于第2d，10d，20d，30d在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況。各組HUVECs缺氧24h/復(fù)氧0h后，Western bIot印跡檢測(cè)HSP22蛋白表達(dá)情況。再將正常對(duì)照組、空白質(zhì)粒組和RNAi組先予缺氧24h處理后分別復(fù)氧0h、3h

3、、6h、12h，采用MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況，RT-PCR和Western blot印跡檢測(cè)Bcl-2和Caspase-3基因和蛋白表達(dá)情況，RT-PCR檢測(cè)NF-κB和Iκ-Bα基因表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.正常對(duì)照組、Lipo組、空白質(zhì)粒組和RNAi組HUVECs缺氧24h/復(fù)氧0h后，HSP22蛋白表達(dá)(0.38±0.05、0.43±0.03、0.45±0.06、0.20±0.02)，RNAi組顯著低于

4、正常對(duì)照組、Lipo組和空白質(zhì)粒組(P<0.05)；而正常對(duì)照組、Lipo組和空白質(zhì)粒組之間HSP22蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 2.相同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)(0，3，6和12h)RNAi組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率高于空白質(zhì)粒組和正常對(duì)照組細(xì)胞抑制率(58.5±2.1％vs.41.6±5.4％，62.7±5.4％vs.45.6±3.7％，65.4±8.4％vs.48.5±5.2％和68.6±6.7％vs.52.9±3.4％，P<0.

5、05)。
　　 3.相同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)(0，3，6和12h)RNAi組Bcl-2基因和蛋白表達(dá)均低于空白質(zhì)粒組和正常對(duì)照組(1.85±0.06 vs.2.65±0.15，1.66±0.04 vs.2.35±0.08，1.09±0.05
　　 vs.2.05±0.08，0.69±0.04 vs.1.75±0.09，P<0.05)和(0.54±0.04 vs.1.05±0.05，0.32±0.05 vs.0.75±0.03，0.

6、29±0.02 vs.0.55±0.03，0.13±0.04 vs.0.45±0.07，P<0.05)。
　　 4.相同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)(0h，3，6和12h)RNAi組Caspase-3基因和蛋白表達(dá)均高于空白質(zhì)粒組和正常對(duì)照組(2.75±0.04 vs.1.75±0.07，2.96±0.04 vs.1.95±0.06，3.59±0.05 vs.2.45±0.05，3.59±0.05 vs.2.77±0.09，P<0.05)和(3.

7、59±0.05 vs.1.75±0.04，6.18±0.24 vs.2.05±0.11，8.82±0.07 vs.2.65±0.12，9.36±0.11 vs.3.05±0.12，P<0.05)。
　　 5.相同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)(0h，3，6和12h)RNAi組NF-κB基因表達(dá)均高于空白質(zhì)粒組和正常對(duì)照組。(2.54±0.03 vs.2.05±0.02，3.26±0.05vs.2.55±0.04，3.85±0.03vs.3.12±0

8、.05，4.34±0.06 vs.3.87±0.04，P<0.05)；相同復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)(0h，3，6和12h)RNAi組Iκ-Bα基因表達(dá)均低于空白質(zhì)粒組和正常對(duì)照組(2.95±0.02 vs.3.65±0.04，2.68±3.17 vs.3.05±0.04，1.75±0.03 vs.2.16±0.02，1.62±0.05 vs.1.89±0.04，P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.H/R損傷誘導(dǎo)下HUVECs可出