心鈉肽對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討心鈉肽(Atrial Natriuretic Peptide,ANP)對(duì)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧再復(fù)氧損傷后的保護(hù)作用。
　　 方法:取凍存的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株復(fù)蘇,傳代培養(yǎng),培養(yǎng)至第三代后,將細(xì)胞按同種濃度接種到24孔培養(yǎng)板上,正常環(huán)境下培養(yǎng)一天,隔天按實(shí)驗(yàn)分組換液:分為三組:1.正常對(duì)照組(n=6)；2.缺氧復(fù)氧組(n=6)缺氧6h再復(fù)氧6h；3.缺氧復(fù)氧+不同濃度ANP組:0.001μg/ml(n=6)；0.0

2、05μg/ml(n=6)；0.01μg/ml(n=6)；0.05μg/ml(n=6)；0.1μg/ml(n=6)缺氧6h再復(fù)氧6h;各組細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別檢測(cè)丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)及超氧化物歧化酶(SOD)活性。用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變:缺氧復(fù)氧組與對(duì)照組相比,內(nèi)皮細(xì)胞形狀

3、上不規(guī)則,細(xì)胞邊界不清,細(xì)胞間隙變寬,可見脫落的細(xì)胞、細(xì)胞碎片及空泡。ANP干預(yù)組較缺氧復(fù)氧組在形態(tài)上發(fā)生形變的細(xì)胞更少,細(xì)胞間隙更窄,脫落的細(xì)胞更少,且隨著藥物濃度的增加,形態(tài)上趨于正常。
　　 2.缺氧復(fù)氧組與正常對(duì)照組比較:細(xì)胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶(LDH)活性較對(duì)照組明顯增高(69.35±5.66U/L vs31.04±3.43 U/L,P<0.01):ANP干預(yù)組各亞組較缺氧復(fù)氧組LDH活性明顯降低(P<0.01),Pea

4、rson相關(guān)分析示LDH活性與ANP濃度呈負(fù)相關(guān),Pearson相關(guān)系數(shù)為-0.771(P<0.05)。缺氧復(fù)氧組培養(yǎng)液中MDA含量較對(duì)照組明顯升高(5.94±0.58nmol/ml vs1.69±0.16nmol/ml,P<0.01);ANP干預(yù)組各亞組MDA含量較缺氧復(fù)氧組明顯降低(P<0.01),MDA含量與ANP濃度做Pearson相關(guān)分析顯示:Pearson系數(shù)為-0.809(P<0.01)。缺氧復(fù)氧組SOD活性較對(duì)照組明顯降

5、低(15.74±2.17U/L vs47.08±4.23U/L,P<0.01)。ANP干預(yù)組各亞組細(xì)胞內(nèi)SOD活性較缺氧復(fù)氧組明顯升高(P<0.01),當(dāng)ANP濃度在(0.001～0.05μg/ml)時(shí),pearson相關(guān)分析顯示:培養(yǎng)液SOD活性與ANP濃度呈正相關(guān):Pearson系數(shù)為0.736(P<0.05)。缺氧復(fù)氧組細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量較對(duì)照組明顯降低(36.81±3.78μmol/L vs89.78±7.01μmol/L,P

6、<0.01),ET-1含量較對(duì)照組明顯升高(1368.64±99.07pg/L vs305.52±35.30pg/L,P<0.01)；ANP干預(yù)組各亞組較缺氧復(fù)氧組ET-1含量明顯減少,而NO含量明顯升高(P<0.01,P<0.01)。Pearson相關(guān)分析顯示:ANP濃度在(0.001～0.05μg/ml)時(shí),各亞組中NO含量與ANP濃度呈正相關(guān)Pearson系數(shù)為0.912(P<0.01),而ET-1含量與ANP濃度呈負(fù)相關(guān):Pea

7、rson系數(shù)為-0.732(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 ①缺氧復(fù)氧組較正常組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞收縮變圓,細(xì)胞間隙增寬,細(xì)胞脫落破碎,光學(xué)顯微鏡下可見粗顆粒及空泡。ANP能使細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。
　　 ②ANP能夠降低缺氧復(fù)氧損傷后培養(yǎng)液中LDH濃度,對(duì)細(xì)胞膜具有保護(hù)作用；ANP能夠降低內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量并且提高內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD活性,從而抑制缺氧復(fù)氧對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞造成的氧化性損傷。