川芎嗪對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討新西蘭大白兔外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）體外分離、培養(yǎng)和分化的方法，并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。觀察過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷效應(yīng)以及川芎嗪（TMP）抗氧化應(yīng)激的效應(yīng)。 方法：采用密度梯度離心法獲取新西蘭大白兔外周血中單個(gè)核細(xì)胞（MNCs），于纖連蛋白（FN）包被的培養(yǎng)板中EBM-2完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化得到EPCs，從細(xì)胞形態(tài)、免疫熒光、免疫細(xì)胞化學(xué)分析表面標(biāo)記物鑒定EPCs。以600umol/L過氧化氫

2、（H2O2）誘導(dǎo)EPCs氧化應(yīng)激損傷，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組，H2O2作用組，H2O2/川芎嗪干預(yù)組（川芎嗪濃度為10ug/ml），應(yīng)用CCK-8法檢測H2O2和TMP對(duì)EPCs增殖的影響，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率，TBA法測定細(xì)胞漿中丙二醛（MDA）含量，分別采用黃嘌呤氧化酶法和比色法測定細(xì)胞培養(yǎng)液上清總超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）活力。 結(jié)果：新西蘭大白兔外周血分離得到的MNC5經(jīng)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)呈內(nèi)皮細(xì)胞樣形

3、態(tài)，表達(dá)EPCs的表面標(biāo)志物CD31、CD34和VEGFR-2等，顯示內(nèi)吞乙?；兔芏戎鞍祝╝c-LDL）、結(jié)合荊豆凝集素1（UEA-1）等內(nèi)皮細(xì)胞的功能特性，提示培養(yǎng)細(xì)胞具有EPCs的形態(tài)、功能和表面蛋白特性。H2O2抑制體外培養(yǎng)的EPCs增殖，且呈濃度依賴性。不同濃度川芎嗪作用于EPCs后可促進(jìn)細(xì)胞增殖，但10ug/mlTMP較1ug/ml濃度組吸光度增加更明顯，20、50、100ug/ml濃度組與10ug/ml組相比無顯著性差異

4、。流式細(xì)胞分析顯示H2O2組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比明顯增高，川芎嗪干預(yù)組明顯抑制H2O2誘導(dǎo)的EPCs凋亡。H2O2可導(dǎo)致EPCs中MDA含量、LDH滲出量明顯增加和SOD活性的下降，而川芎嗪干預(yù)可明顯抑制EPCs的氧化應(yīng)激反應(yīng)。 結(jié)論：兔外周血中存在具有分化增殖能力的EPCs，可通過密度梯度離心法分離得到，在體外經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后可穩(wěn)定分化、擴(kuò)增。H2O2抑制EPCs增殖，川芎嗪促進(jìn)EPCs增殖并對(duì)H2O2誘導(dǎo)的EPCs凋亡和氧化損