川芎嗪對膿毒癥致急性腎損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、膿毒癥(Sepsis)是感染引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)，可進展為感染性休克和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)；是危重病患者常見的死亡原因之一。據(jù)報道，膿毒癥的死亡率達18％～19％，嚴重膿毒癥的病死率更高達40％～50％，且其發(fā)病率還在以每年1.5％～9％的速度增長。目前，膿

2、毒癥導(dǎo)致組織器官功能障礙的病理生理學(xué)機制還不十分明確，因此，深入探索膿毒癥的病理生理過程及其發(fā)生機制，尋找新的治療方法，對于降低膿毒癥患者的病死率具有重要意義。腎臟是容易遭受到打擊的靶器官之一，在急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)的早期，腎小球濾過率(glomerular filtration rate，GFR)下降，或GFR尚正常而腎臟已出現(xiàn)組織學(xué)及生物標(biāo)志物等損傷性改變時，又可使膿毒癥患者的病死率明顯增加；

3、
　　 川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)是從傘形科植物川芎中提取的一種生物堿單體，具有抑制機體過度炎癥反應(yīng)，減少氧自由基（oxygen free radical，OFR）產(chǎn)生、拮抗鈣離子和維持線粒體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、改善微循環(huán)和抗凝血等作用，被應(yīng)用于急、慢性腎功能衰竭治療。本實驗研究探討脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）制備的膿毒癥造成AKI的發(fā)病機制，給予TMP干預(yù)后，通過觀察實驗動物腎臟

4、水腫程度，尿量變化，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C （cystatin C，Cys C）、血管性假性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）測定和腎臟病理學(xué)觀察，研究TMP對膿毒癥致AKI的作用機制，評價TMP對膿毒癥致AKI預(yù)防和治療的效果，為臨床治療膿毒癥致AKI提供新的有效治療手段。
　　 目的：
　　 制備膿毒癥兔實驗動物模型；通過對腎臟的水腫程度、尿量、血半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、血管性假性血友病

5、因子測定和腎臟病理學(xué)觀察，探討膿毒癥所致AKI的發(fā)病機制；使用TMP進行預(yù)防和治療，觀察TMP對膿毒癥所致腎損傷的預(yù)防和治療作用效果，探討其作用機制。
　　 方法：
　　 36只新西蘭大白兔隨機分為3組：正常空白對照組（C組）、膿毒癥模型組（M組）和TMP預(yù)防組（P組），每組12只。靜脈注射脂多糖（LPS,1mg/kg）制備膿毒癥實驗動物模型，正?？瞻讓φ战M給予等量的生理鹽水，P組在靜脈注射LPS后相繼靜脈注射TMP (

6、60 mg/kg)；達到膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[5-6]后，觀察4 h，收集尿量，實驗結(jié)束時測定血半胱氨酸蛋白酶抑制劑C（Cys-C）濃度；處死實驗動物后提取腎臟組織，測定腎臟含水率，取腎組織進行病理學(xué)觀察，用免疫組化方法檢測腎組織vWF（vWF）
　　 結(jié)果：
　　 1.膿毒癥實驗動物模型成功制備實驗動物在靜脈注射LPS 1mg/kg后，出現(xiàn)發(fā)熱（肛溫超過自身正常值1℃），心率和呼吸頻率逐漸加快，升高超過20％以上，確立為膿毒

7、癥實驗兔模型制備成功。
　　 2.各組間腎臟含水率、4 h尿量及血Cys-C比較與M組比較，C和P組腎臟含水率、血清Cys-C較低(P<0.05)，第4 h尿量明顯增多(P<0.01)；C組和P組間各項比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.腎臟vWF檢測用免疫組化技術(shù)檢測vWF。在光鏡下，M組的腎小球毛細血管內(nèi)皮細胞和腎間質(zhì)毛細血管內(nèi)皮細胞下的vWF染色部分陽性（++）。P組腎間質(zhì)和腎小球細胞毛細血管內(nèi)皮細胞

8、下的vWF染色較少（+），與C組的差異不明顯。
　　 4.腎臟組織病理學(xué)4.1 HE染色表現(xiàn)在光鏡下觀察可見，M組腎小球有少量纖維組織增生，同時伴有炎性細胞浸潤，以淋巴細胞為主；腎小球腫脹比較明顯，里面結(jié)構(gòu)不清晰，增生和浸潤的細胞可壓迫毛細血管袢使毛細血管腔變窄、甚至閉塞，腎小囊腔明顯變小狹窄。P組可見腎小球組織細胞水腫，未見有腎小球纖維化改變，腎小囊腔未見狹窄和閉塞。
　　 4.2 電子顯微鏡觀察電鏡觀察，M組腎小球濾

9、過膜的臟層上皮細胞的部分足突融合，毛細血管內(nèi)皮細胞和基底膜之間可見少量電子致密物沉積；近曲腎小管上皮細胞刷狀緣面的微絨毛斷裂，上皮細胞內(nèi)線粒體腫脹，空泡樣變性，棘突消失。P組腎小球濾過膜的臟層上皮細胞的足突可見部分融合；近曲腎小管上皮細胞內(nèi)少量線粒體腫脹，空泡變性不明顯。
　　 結(jié)論：
　　 1.新西蘭大白兔靜脈注射1mg/kg內(nèi)毒素，可以成功制備兔膿毒癥實驗動物模型。
　　 2.膿毒癥可導(dǎo)致AKI，在早期以腎小