Irisin對(duì)高脂高糖作用下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胰島素抵抗相關(guān)通路的作用研究.pdf

1、目的：
　　2型糖尿病患者極易合并血管并發(fā)癥，其病理機(jī)制與2型糖尿病患者慢性炎癥狀態(tài)及胰島素抵抗密不可分。新的肌肉因子Irisin可改善2型糖尿病胰島素抵抗，并具有抗炎效應(yīng)。因此，本實(shí)驗(yàn)研究Irisin對(duì)體外高脂高糖培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞胰島素作用通路和炎癥通路的影響，同時(shí)探討Irisin是否能抑制高脂高糖引起的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及功能損傷。
　　方法：
　　體外高脂高糖培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），用不同濃度的Ir

2、isin進(jìn)行干預(yù)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)Irisin對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞胰島素受體底物1（IRS-1）、蛋白激酶B（Akt）及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4（GLUT4）的影響。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)Irisin處理后細(xì)胞上清液白細(xì)胞介素-1（IL-1）和腫瘤壞死因子alpha（TNF-α）水平，RT-PCR、Western blot檢測(cè)核因子kappaB（NF-κB）通路信號(hào)分子及黏附分子的mRNA和蛋白

3、表達(dá)水平。同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Irisin干預(yù)后內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡情況，葡萄糖氧化酶法測(cè)定細(xì)胞葡萄糖的消耗量，內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞遷移功能。
　　結(jié)果：
　　結(jié)果顯示高脂高糖組IRS-1磷酸化水平下降，且細(xì)胞膜的GLUT4蛋白表達(dá)減少，表明高脂高糖環(huán)境損傷了HUVECs的胰島素作用通路。而Akt磷酸化水平并未改變。Irisin干預(yù)后IRS-1磷酸化、Akt磷酸化及細(xì)胞膜GLUT4表達(dá)水平均升高，說(shuō)明Irisin改善了H

4、UVECs的胰島素作用通路。同時(shí)加入胰島素后檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖消耗量，發(fā)現(xiàn)高脂高糖組葡萄糖消耗較正常組減少，Irisin干預(yù)組細(xì)胞葡萄糖消耗量較高脂高糖組升高，進(jìn)一步說(shuō)明Irisin可以改善HUVECs胰島素抵抗。除此之外，結(jié)果顯示高脂高糖環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞IL-1和TNF-α等炎癥因子及細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1）和單核細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）等黏附分子表達(dá)增加，且炎癥通路NF-κBp65蛋白

5、表達(dá)水平及IκBα磷酸化水平均升高。而Irisin干預(yù)組上述炎癥因子及黏附分子的表達(dá)下降，且NF-κBp65蛋白表達(dá)水平及核因子kappaB抑制蛋白（IκBα）磷酸化水平也下降，顯示出Irisin可抑制內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路及其下游因子的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看到Irisin干預(yù)組較高脂高糖組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡減少，內(nèi)皮細(xì)胞增殖及遷移明顯改善。
　　結(jié)論：
　　Irisin可以改善高脂高糖誘