核酸檢測技術(shù)在日本血吸蟲感染宿主早期診斷及療效考核中的應(yīng)用研究.pdf

1、本研究擬在課題組在已成功建立PCR法檢測日本血吸蟲特異性DNA的研究基礎(chǔ)上，進一步探索核酸檢測技術(shù)在日本血吸蟲病早期診斷及療效考核中的應(yīng)用。首先驗證了PCR法對日本血吸蟲感染家兔模型的不同組織樣本(包括日本血吸蟲成蟲、蟲卵、感染家兔的肝組織、糞便和外周血清)中日本血吸蟲特異性DNA的檢測結(jié)果，且進一步確定了PCR法檢測的敏感性和特異性，結(jié)果顯示其敏感性為80fg/μL的DNA水平，所檢測的DNA片段是日本血吸蟲特異的，與曼氏血吸蟲及華支

2、睪吸蟲均無交叉反應(yīng)。對感染家兔的血清DNA的檢測結(jié)果證明了PCR法對日本血吸蟲感染的早期診斷和療效考核價值，即可從感染后第1w的血清中擴增出特異條帶，于治療后第12w即轉(zhuǎn)為陰性，與以往研究結(jié)果基本一致。 在已建立的PCR法的基礎(chǔ)上，本研究進一步建立了一種新型快速、靈敏的核酸檢測法，即環(huán)媒介導(dǎo)的恒溫擴增法(簡稱LAMP法)，并與PCR法比較檢測的敏感性和特異性，結(jié)果表明，LAMP法的敏感性顯著高于PCR法，約為PCR法的104倍，

3、可擴增出極微量水平的DNA(0.08fg／μl)，亦未見與曼氏血吸蟲、華支睪吸蟲的交叉反應(yīng)。在日本血吸蟲感染家兔模型的早期診斷和療效考核的實驗中，LAMP法同樣可從感染后第1w的血清中檢測出陽性結(jié)果，對療效考核的評價表明LAMP法在治療后第13w時即轉(zhuǎn)為陰性，較PCR法晚一周轉(zhuǎn)陰，顯示出其具有更高的敏感性。 為深入探討日本血吸蟲感染宿主血清中核酸物質(zhì)的來源，本實驗建單、雙性感染小鼠模型進行研究。結(jié)果初步證實在日本血吸蟲感染早期，

4、血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于移行過程中死亡的童蟲以及蟲體發(fā)育過程中更新脫落的表皮組織，而在感染的急性期和慢性期，小鼠血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于蟲卵的分解產(chǎn)物。從而為應(yīng)用核酸檢測法早期診斷日本血吸蟲感染，尤其是為療效考核提供了理論依據(jù)。 在動物模型實驗研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用兩種核酸檢測法檢測了30例日本血吸蟲病慢性期病人血清。結(jié)果顯示，PCR法可從30例病人血清中檢測出18例陽性結(jié)果，陽性率為60％，而LAMP法可檢測出29例陽