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文檔簡介
1、本研究擬在課題組在已成功建立PCR法檢測日本血吸蟲特異性DNA的研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探索核酸檢測技術(shù)在日本血吸蟲病早期診斷及療效考核中的應(yīng)用。首先驗(yàn)證了PCR法對日本血吸蟲感染家兔模型的不同組織樣本(包括日本血吸蟲成蟲、蟲卵、感染家兔的肝組織、糞便和外周血清)中日本血吸蟲特異性DNA的檢測結(jié)果,且進(jìn)一步確定了PCR法檢測的敏感性和特異性,結(jié)果顯示其敏感性為80fg/μL的DNA水平,所檢測的DNA片段是日本血吸蟲特異的,與曼氏血吸蟲及華支
2、睪吸蟲均無交叉反應(yīng)。對感染家兔的血清DNA的檢測結(jié)果證明了PCR法對日本血吸蟲感染的早期診斷和療效考核價值,即可從感染后第1w的血清中擴(kuò)增出特異條帶,于治療后第12w即轉(zhuǎn)為陰性,與以往研究結(jié)果基本一致。 在已建立的PCR法的基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步建立了一種新型快速、靈敏的核酸檢測法,即環(huán)媒介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增法(簡稱LAMP法),并與PCR法比較檢測的敏感性和特異性,結(jié)果表明,LAMP法的敏感性顯著高于PCR法,約為PCR法的104倍,
3、可擴(kuò)增出極微量水平的DNA(0.08fg/μl),亦未見與曼氏血吸蟲、華支睪吸蟲的交叉反應(yīng)。在日本血吸蟲感染家兔模型的早期診斷和療效考核的實(shí)驗(yàn)中,LAMP法同樣可從感染后第1w的血清中檢測出陽性結(jié)果,對療效考核的評價表明LAMP法在治療后第13w時即轉(zhuǎn)為陰性,較PCR法晚一周轉(zhuǎn)陰,顯示出其具有更高的敏感性。 為深入探討日本血吸蟲感染宿主血清中核酸物質(zhì)的來源,本實(shí)驗(yàn)建單、雙性感染小鼠模型進(jìn)行研究。結(jié)果初步證實(shí)在日本血吸蟲感染早期,
4、血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于移行過程中死亡的童蟲以及蟲體發(fā)育過程中更新脫落的表皮組織,而在感染的急性期和慢性期,小鼠血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于蟲卵的分解產(chǎn)物。從而為應(yīng)用核酸檢測法早期診斷日本血吸蟲感染,尤其是為療效考核提供了理論依據(jù)。 在動物模型實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,應(yīng)用兩種核酸檢測法檢測了30例日本血吸蟲病慢性期病人血清。結(jié)果顯示,PCR法可從30例病人血清中檢測出18例陽性結(jié)果,陽性率為60%,而LAMP法可檢測出29例陽
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