感染日本血吸蟲(chóng)引起宿主循環(huán)MicroRNAs表達(dá)變化的研究.pdf

1、日本血吸蟲(chóng)病是人獸共患，嚴(yán)重的危害了人類和動(dòng)物健康。雖然，我國(guó)血吸蟲(chóng)病的防控取得了舉世矚目的成就，但是隨著近來(lái)氣候變暖、生態(tài)和經(jīng)濟(jì)社會(huì)等因素的變化，血吸蟲(chóng)病防控又面臨諸多新的挑戰(zhàn)。為了更好的控制血吸蟲(chóng)病，需要利用現(xiàn)代分子生物技術(shù)系統(tǒng)研究血吸蟲(chóng)病原生物學(xué)，深入揭示血吸蟲(chóng)感染和寄生蟲(chóng)的分子機(jī)理，開(kāi)拓血吸蟲(chóng)病防控的新途徑。
　　本論文主要研究了感染了日本血吸蟲(chóng)后終末宿主體內(nèi)循環(huán)性microRNAs的變化，主要分為以下兩方面:1）感染日本

2、血吸蟲(chóng)宿主體內(nèi)循環(huán)microRNAs（Circulating microRNAs）序列測(cè)定以及靶基因功能預(yù)測(cè)分析;2）qRT-PCR驗(yàn)證分析。具體如下:
　　一、利用生物信息學(xué)方法對(duì)獲得小RNAs序列進(jìn)行系統(tǒng)分析，鑒定與血吸蟲(chóng)感染相關(guān)的循環(huán)性miRNAs并預(yù)測(cè)其功能。在本研究中，兩次生物學(xué)重復(fù)實(shí)驗(yàn)中共發(fā)現(xiàn)173條miRNAs差異表達(dá)。
　　進(jìn)一步分析表明感染后有64個(gè)已知miRNAs在P1和P2呈現(xiàn)差異表達(dá)（差異倍數(shù)在兩倍以

3、上），其中12個(gè)下調(diào)，52個(gè)上調(diào)。將P1與P2（P1:感染后14、28天后大白兔血漿所建的庫(kù);P2:感染后10、14、28、32天后大白兔血漿所建的庫(kù)）分別與未感染的家兔血漿小RNA庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，獲得感染后特有的小RNAs并進(jìn)行分類分析。對(duì)未注釋的特異性的小RNA進(jìn)行新miRNAs預(yù)測(cè)，結(jié)果表明P1有191條新miRNAs，P2中有190條新miRNAs。對(duì)感染后宿主特異性表達(dá)的循環(huán)miRNAs以人的數(shù)據(jù)庫(kù)為參考進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，結(jié)果表明在

4、124個(gè)miRNAs中按照最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件（只考慮五個(gè)軟件都能預(yù)測(cè)到的靶基因），我們共獲得了18個(gè)miRNAs以及它們所調(diào)控的共416條靶基因。用David數(shù)據(jù)庫(kù)提供的在線工具Pather進(jìn)行了靶基因GO聚類分析，結(jié)果表明主要參與包括細(xì)胞進(jìn)程、代謝調(diào)控、生命調(diào)控、發(fā)育進(jìn)程等生物學(xué)進(jìn)程。分子功能分析表明主要參與結(jié)合、催化活性等分子功能。KEGG代謝調(diào)控分析表明，這些miRNAs主要與信號(hào)調(diào)節(jié)通路相關(guān)如有13個(gè)靶基因參與了整聯(lián)素信號(hào)通路，9個(gè)參