PRRSV CH-1R株黏膜免疫效果的測(cè)定及其ORF5的遺傳變異分析.pdf

1、本研究選用6周齡大的長(zhǎng)白系雜交仔豬,用于PRRSV CH-1R致弱毒株黏膜免疫效果的測(cè)定.通過臨床癥狀、病理學(xué)變化和抗體分布的檢測(cè)證實(shí)了PRRSV CH-1R致弱毒株經(jīng)鼻腔免疫的安全性和黏膜免疫反應(yīng).而且我們還檢測(cè)了經(jīng)鼻腔免疫PRRSV CH-1R致弱毒株的仔豬的IgA和IgG抗體水平、IFN-γ和TGF β-β1細(xì)胞因子水平等方面.通過研究表明,弱毒免疫組的某些組織器官在臨床剖檢和組織病理學(xué)上有一定的變化,但與強(qiáng)毒組相比程度較輕;間接

2、免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果顯示,免疫組明顯比對(duì)照組和強(qiáng)毒組的熒光反應(yīng)要強(qiáng);鼻灌洗液和肺灌洗液中,免疫組sIgA的水平在免疫后隨時(shí)間的延長(zhǎng),呈現(xiàn)上升趨勢(shì),攻強(qiáng)毒后,sIgA水平明顯升高;免疫組血清中,TGF-β1細(xì)胞因子水平隨免疫時(shí)間的延長(zhǎng),在免疫第14天前是呈上升趨勢(shì)的,從免疫14天后呈下降趨勢(shì),攻強(qiáng)毒后,TGF-β1細(xì)胞因子水平在攻毒后前7天時(shí)呈快速上升,并且上升速度比免疫前期快,但在攻毒14天后已經(jīng)開始下降;IFN-γ細(xì)胞因子水平隨免疫時(shí)間的

3、延長(zhǎng),變化與對(duì)照組基本一致,IgG抗體水平隨免疫時(shí)間的延長(zhǎng),從免疫14天后呈上升趨勢(shì),在免疫35天后達(dá)到平臺(tái)期,攻強(qiáng)毒后,IgG抗體水平明顯升高,并且上升速度比免疫前期快.綜合所有的檢測(cè)結(jié)果我們認(rèn)為,經(jīng)鼻黏膜免疫接種PRRSV CH-1R株弱毒疫苗,可以刺激機(jī)體產(chǎn)生較高的黏膜免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng),有效的保護(hù)易感動(dòng)物. 在進(jìn)行動(dòng)物免疫試驗(yàn)的同時(shí),本研究選取了10個(gè)不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒利用RT-PCR擴(kuò)增ORF

4、5基因,并與其它8株序列進(jìn)行序列比對(duì),分析CH-1R株致弱過程中的遺傳變異情況.ORF5基因的變異分析顯示,該致弱毒株與CH-1a株以及其它8株參考毒株存在著差異,ORF5基因同源性在88.7﹪～99.8﹪.而且系統(tǒng)進(jìn)化樹研究表明,該弱毒株仍屬于CH-1a亞群.通過軟件對(duì)其所編碼的GP5蛋白的氨基酸序列比較,我們發(fā)現(xiàn)相對(duì)于CH-1a株,CH-1a株S70、CH-1R株S85、S100、S115、S120、S125和S130代病毒在第38