豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離、鑒定及ORF5基因的克隆及變異分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種新的、高度傳染性疾病，臨床上以母豬發(fā)熱、厭食、早產(chǎn)、流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障礙及各種年齡豬的呼吸癥狀和仔豬的高死亡率為特征。該病最早于1987年報(bào)道于美國(guó)南部，現(xiàn)已遍及世界各地，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，全國(guó)各地很多豬場(chǎng)都出現(xiàn)了以母豬繁殖障礙、仔豬呼吸困難為

2、特征的傳染病。為了弄清病因，解決生產(chǎn)實(shí)際，特此開(kāi)展了豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離和鑒定工作。 利用MARC-145細(xì)胞，從河南原陽(yáng)地區(qū)發(fā)病豬的肺臟中分離到疑似PRRSV毒株，并對(duì)其中一株病毒進(jìn)行了全面的鑒定。該病毒在MARC-145細(xì)胞上增殖滴度為10-4．39/0．1ml。能被美洲型PRRSV陽(yáng)性血清所中和，而不能被抗豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒、豬細(xì)小病毒的陽(yáng)性血清中和。為了進(jìn)一步從分子生物學(xué)進(jìn)行鑒定，設(shè)計(jì)了特異性引物對(duì)病毒的囊

3、膜蛋白基因（ORF6）進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增到大小約為500bp的片段，與預(yù)期大小相當(dāng)，而陰性對(duì)照則不能擴(kuò)增出相應(yīng)大小的片段。根據(jù)以上結(jié)果，證實(shí)所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒，并且屬于美洲型，命名為PRRSV HN-Y株。 采用RT-PCR擴(kuò)增了PRRSV HN-Y株ORF5基因完整cDNA，并進(jìn)行了克隆與序列測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRRSV HN-Y株ORF5可編碼200個(gè)氨基酸殘基，與PRRSV歐洲型代表株（LV株）、美