NDV分離株的遺傳變異分析與McAb1E5模擬抗原表位的篩選.pdf

1、新城疫病毒(NDV)引發(fā)的新城疫(ND)是禽類的一種接觸性、烈性傳染病，發(fā)病急，感染率和死亡率高，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。NDV表面的血凝素-神經(jīng)氨酸酶(HN)是主要的免疫保護性抗原，與病毒的毒力和致病性密切相關(guān)。 從病雞輸卵管積液中分離了一株新城疫病毒(命名為SHY06)，經(jīng)蝕斑純化后測定其雞胚平均死亡時間和1日齡雛雞腦內(nèi)致病指數(shù)分別為52h和2.0，F(xiàn)蛋白裂解位點氨基酸序列為112-RRQKRF-117，符合強毒NDV的

2、特征。根據(jù)F基因(1～374bp)對SHY06和19個NDV參考毒株進行基因分型，結(jié)果表明SHY06屬于基因Ⅶ型。F基因氨基酸序列同源性比較顯示SHY06與基因Ⅶ型NDV分離株同源性為97.5％～99.5％，與基因Ⅸ型NDV(F48E9等)同源性為91.7％～92.4％，與基因Ⅱ型(疫苗株LaSota等)同源性為89.2％。HN基因氨基酸序列同源性比較顯示SHY06與近年來分離株同源性較高，為92.1％～99.7％，與疫苗株(LaSot

3、a)和標(biāo)準(zhǔn)強毒株(F48E9)同源性較低，分別為87.6％和89.9％。 用兩株針對新城疫病毒HN基因的單抗1E5和C3-B7檢測NDV，均具有血凝抑制性(HI)，免疫球蛋白亞類分別為IgG2a和IgG1。用HiTrapprotein-A層析柱對這兩株單抗進行了親和純化。收集不同洗脫階段的液體進行蛋白含量測定，結(jié)果表明5mL的洗脫液洗脫后，第1～2mL洗脫液中單抗含量最高。用SDS-PAGE電泳對純化產(chǎn)物進行純度鑒定，結(jié)果表明單

4、抗純化后只有重鏈和輕鏈兩條帶。 得到純化的單克隆抗體后，課題組對單克隆抗體1E5進行了模擬抗原表位的篩選。利用噬菌體隨機7肽庫篩選新城疫病毒(NDV)HN蛋白的B細(xì)胞抗原位點。以NDVLaSota株HN蛋白的單克隆抗體(McAb)1E5為靶分子，采用噬菌體隨機7肽庫進行親和篩選，經(jīng)過三輪篩選后得到4組可用的7肽序列。同源性分析表明展示肽序列與HN蛋白的388～395位氨基酸具有較高的同源性，競爭ELISA實驗證明篩選到的克隆能與