乙肝疫苗應(yīng)答的母源性免疫傳遞研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　經(jīng)典免疫學(xué)理論認為新生兒免疫是以母源性抗體提供的被動免疫為主，主動免疫功能尚不成熟，這種狀態(tài)一直持續(xù)到出生后的2-3個月，即為窗口期，這一時期很難建立免疫應(yīng)答，因此大部分疫苗也就延遲接種[1,2]。然而，有研究顯示這一時期也存在主動免疫，HIV、HSV等胞內(nèi)病原體感染引起的新生兒急性炎癥就是主動免疫存在的直接證據(jù)[3]。此外，嬰兒出生后就接種了乙肝疫苗，其應(yīng)答率和成人相近[4,5]，這就使得窗口期主動免疫是否

2、成熟再次成為學(xué)術(shù)界爭議的焦點。動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的一個有趣的現(xiàn)象為我們提供了線索：接種過疫苗的母體其子代疫苗應(yīng)答率也高，進一步研究表明母體的主動免疫通過初乳的單核細胞（PBMC）傳遞給子代[6,7]。既然母源性PBMC在動物子代發(fā)揮了主動免疫功能，從而推測人類母源性PBMC也可能有類似作用。據(jù)此，我們提出嬰兒乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞假說，探討經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體，其主動免疫是否可以傳遞給子代，并試圖解釋新生兒主動免疫功能不成熟與乙肝疫苗高應(yīng)答率

3、這一矛盾，本研究在國內(nèi)外尚屬首次。
　　研究方法：
　　本研究通過動物實驗和人群研究兩方面，探討經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體，其主動免疫是否可以傳遞給子代。
　　1.動物實驗部分：分別于2009年3月-2009年12月和2010年3月-2010年12月在陜西省西安市及甘肅省武威市進行兩批動物實驗。實驗開始前檢測母豬血清抗-HBs水平（ELISA方法，上海科華公司試劑盒）。懷孕母豬隨機分為實驗組與對照組；第一批實驗中每只母豬所產(chǎn)

4、小豬均隨機分為免疫組與非免疫組，第二批實驗中所有小豬均為免疫組。實驗組母豬及免疫組小豬進行乙肝疫苗全程免疫（3次乙肝疫苗頸部皮下分兩點注射，20μg/次）。小豬免疫完成后設(shè)計10次采血時間點采集血清（免疫完成后1w～10w），定性（ELISA方法，上海科華公司試劑盒）及定量（電化學(xué)發(fā)光法，德國羅氏公司試劑盒）檢測抗-HBs水平。分析實驗組與對照組母豬所產(chǎn)小豬抗-HBs滴度及陽性率的差異。
　　2.人群研究部分：2010年5月-20

5、10年10月，在甘肅省武威市人民醫(yī)院、涼州區(qū)醫(yī)院、涼州區(qū)第三醫(yī)院及永昌鎮(zhèn)共收集母親及其嬰幼兒328對（母親既往無HBV感染史，嬰幼兒月齡為8～48月），其中三所醫(yī)院74對，永昌鎮(zhèn)254對，并進行流行病學(xué)調(diào)查及采集血液標(biāo)本。進行血清HBsAg定性（ELISA方法，上?？迫A公司試劑盒）檢測，抗-HBs定性（ELISA方法，上?？迫A公司試劑盒）及定量（電化學(xué)發(fā)光法，德國羅氏公司試劑盒）檢測。采用回顧性隊列研究的方法（以母親抗-HBs滴度≥10

6、mIU/mL為暴露，并按嬰兒三針乙肝疫苗均及時接種來進行分層），分析抗-HBs陽性組與陰性組的母親所產(chǎn)嬰兒接受乙肝疫苗全程免疫后產(chǎn)生抗-HBs滴度的差異。
　　3.統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS16.0軟件建數(shù)據(jù)庫進行雙人錄入。采用SPSS16.0軟件和SAS9.1軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，Excel軟件作圖。統(tǒng)計學(xué)方法主要應(yīng)用了t檢驗（或t’檢驗），χ2檢驗（或Fisher確切概率法），兩個重復(fù)測量因素的方差分析，秩和檢驗，雙變量相關(guān)分析等

7、。
　　研究結(jié)果：
　　1.動物實驗部分：納入研究的母豬為9只，生產(chǎn)小豬79只（存活53只，存活率67.1％）。①所有小豬血清（共400份）抗-HBs定性檢測結(jié)果顯示：免疫組小豬在大多數(shù)采血時間點抗-HBs為陽性，非免疫組小豬抗-HBs均為陰性；實驗組母豬所產(chǎn)小豬的抗體陽性率高于對照組，并且隨觀察時間延長，總實驗組與總對照組的免疫小豬抗體陽性率差異更加明顯。②小豬血清抗-HBs定量檢測結(jié)果顯示：單獨的每個采血時間點的小豬血清

8、抗-HBs滴度的對數(shù)值進行比較，實驗組母豬（接種乙肝疫苗的母豬）所產(chǎn)小豬均顯著大于對照組（在免疫后4w、5w，P<0.05；在免疫后1w、2w、3w、6w、7w、8w、9w、10w，P<0.01）；將所有采血點的定量檢測結(jié)果進行重復(fù)測量資料方差分析，發(fā)現(xiàn)實驗組母豬所產(chǎn)小豬經(jīng)乙肝疫苗免疫后產(chǎn)生抗-HBs滴度顯著大于對照組母豬所產(chǎn)小豬（P<0.001）；根據(jù)小豬血清抗-HBs滴度分級進行分析，仍然得到一致結(jié)果。
　　2.人群研究部分：

9、共調(diào)查研究對象328對母親及其嬰幼兒（男嬰191名，女嬰137名），母親平均年齡為30±5歲，嬰幼兒平均月齡為27±10月。排除HBsAg+母親及生產(chǎn)后有乙肝疫苗接種的母親后，列入統(tǒng)計分析的研究對象為285對，其中，分層后嬰兒三針乙肝疫苗均及時接種的研究對象為158對。①母親與嬰幼兒血清抗-HBs水平檢測結(jié)果：共有56.8％（162/285）的母親和33.0％（94/285）的嬰幼兒抗-HBs滴度＜10mIU/mL；43.2％（123/

10、285）的母親和67.0％（191/285）的嬰幼兒抗-HBs滴度≥10mIU/mL。②對嬰幼兒乙肝疫苗免疫接種史的調(diào)查顯示：第一針、第二針和第三針乙肝疫苗的及時接種率分別為96.8％（276/285），84.2％（240/285）和60.0％（171//285）；3針中有≥1針延遲接種即判定為乙肝疫苗延遲接種，共127名嬰幼兒，占44.6％。③回顧性隊列研究結(jié)果顯示：分層前（285對）分析結(jié)果顯示：母親抗-HBs陽性組（抗-HBs滴度

11、≥10mIU/mL）與母親抗-HBs陰性組（抗-HBs滴度＜10mIU/mL）的嬰幼兒抗-HBs滴度無顯著性差異。分層后研究隊列（158對）分析結(jié)果顯示：母親抗-HBs陽性組的嬰幼兒抗-HBs滴度顯著高于母親抗-HBs陰性組（P<0.05）；兩組嬰幼兒的抗-HBs滴度分級也有顯著性差異（P<0.05）。④母乳喂養(yǎng)的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，94.0％的新生兒出生7天內(nèi)有母乳喂養(yǎng)（其中88.8％的嬰兒在出生3天內(nèi)即開始），并且有82.1％的新生兒母乳

12、喂養(yǎng)量占總奶量的2/3以上。分析出生7天內(nèi)有母乳喂養(yǎng)與嬰幼兒抗-HBs滴度水平的關(guān)系，結(jié)果顯示：分層前研究隊列（285對）中，有初乳喂養(yǎng)組和無初乳喂養(yǎng)組嬰幼兒抗-HBs滴度水平無顯著性差異。在分層后研究隊列（158對）中：有初乳喂養(yǎng)的嬰兒的乙肝疫苗應(yīng)答率（69.5％）顯著高于無初乳喂養(yǎng)的嬰兒（28.6％），P<0.05；兩組嬰兒抗-HBs滴度分級也有顯著性差異（P<0.05）。⑤將母親生產(chǎn)前有乙肝疫苗接種史的研究對象選出，從定性和定量兩

13、方面，分析在這部分人群中，母親抗-HBs與嬰幼兒抗-HBs的關(guān)系。結(jié)果顯示母親抗-HBs陽性組與陰性組的嬰幼兒抗-HBs滴度及滴度的分級數(shù)據(jù)均無顯著性差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.國內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)在哺乳動物的母代與子代之間存在著乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞現(xiàn)象：接種過乙肝疫苗的母豬所產(chǎn)小豬經(jīng)過乙肝疫苗免疫程序后，其血清抗-HBs滴度顯著大于對照組母豬所產(chǎn)小豬。
　　2.通過回顧性隊列研究，從人群角度探討本課題提出

14、的嬰兒乙肝疫苗應(yīng)答的母嬰傳遞假說：母親抗-HBs陽性組的嬰幼兒抗-HBs滴度顯著高于母親抗-HBs陰性組的嬰幼兒；有初乳喂養(yǎng)的嬰兒的乙肝疫苗應(yīng)答率顯著大于無初乳喂養(yǎng)的嬰兒。但是，對母親生產(chǎn)前有乙肝疫苗接種史的研究對象進行分析時，由于許多母親對生產(chǎn)前乙肝疫苗接種史記憶不清，導(dǎo)致樣本量偏少，還未能排除乙肝疫苗應(yīng)答的遺傳易感性對實驗結(jié)果的影響。
　　3.本研究的結(jié)果初步補充了新生兒乙肝疫苗免疫的理論：經(jīng)乙肝疫苗免疫的母體，其主動免疫可以