廣東省乙肝疫苗免疫失敗兒童乙肝病毒S基因特征分析.pdf

1、乙肝病毒是一種DNA病毒，具有特殊的復(fù)制過程，形成RNA/DNA中間體，在有外界免疫壓力的情況下，基因容易發(fā)生變異，從而逃避機(jī)體的清除。我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，為降低乙肝的感染率，我國(guó)推廣在兒童特別是新生幾中接種乙肝疫苗。由病毒s基因編碼的表面抗原蛋白是誘導(dǎo)病毒產(chǎn)生中和抗體的蛋白，．目前乙肝疫苗采用的就是這一蛋白。十幾年過去了，兒童的表面抗原陽性率下降到5.75﹪，乙肝病毒傳播得到有效控制。但在部分兒童中存在疫苗免疫失敗的情況，影響了疾

2、病的控制。據(jù)分析有多種原因可導(dǎo)致這種情況，乙肝病毒S基因變異是其中之一。本研究分析了廣東省乙肝疫苗免疫失敗兒童中S基因的序列特點(diǎn)，對(duì)引起氨基酸變異的突變基因位點(diǎn)進(jìn)行序列比較，分析基因變異對(duì)于乙肝疫苗免疫效果的影響。 研究共收集廣東省疾病預(yù)防控制中心肝炎監(jiān)測(cè)標(biāo)本1573份。采用血清學(xué)方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行篩查，挑選正常完成乙肝疫苗接種后，核心抗體檢測(cè)結(jié)果為陽性而表面抗原為陽性或表面抗體為陰性的標(biāo)本作為研究對(duì)象。對(duì)篩選出來的標(biāo)本進(jìn)行PCR擴(kuò)

3、增和序列測(cè)定。測(cè)得的S基因全序列，采用DNAStar、Anthepro和HMMTOP等軟件與Genbank和EMBL中的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，并分析核苷酸和氨基酸變異的理化特點(diǎn)和二級(jí)結(jié)構(gòu)變化。 本研究通過PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，共得到23份標(biāo)本的S基因序列。23份標(biāo)本中1份標(biāo)本核心抗體陽性而表面抗原/表面抗體陰性，2份為表面抗原/表面抗體/核心抗體陽性，其余為表面抗原/核心抗體陽性標(biāo)本。23株病毒中僅2株毒株為C基因型的Cs

4、亞組，其余21株均為B基因型Ba亞組，占91.3﹪，未發(fā)現(xiàn)其它亞型。23份標(biāo)本中20份明確為adw血清型，adw血清型的比例至少為87﹪(20/23)，1份為adr，另外2份可能分別為adr和adw。病毒S基因核苷酸變異分析表明，有17株出現(xiàn)了核苷酸變異，其中11株在"α"決定簇片段內(nèi)出現(xiàn)了變異，該片段內(nèi)每100個(gè)核苷酸的平均置換頻率為1.51﹪，遠(yuǎn)高于全基因的平均置換頻率0.49﹪，有顯著性差異(p<0.001)。氨基酸變異分析表明，

5、14份標(biāo)本出現(xiàn)了氨基酸替換，變異株的發(fā)生率為60.8﹪，這些變異株中13株為B亞型毒株，1份為C亞型毒株。一份表面抗原/表面抗體/核心抗體陽性的標(biāo)本，在α抗原決定簇內(nèi)出現(xiàn)了K143M和G145A變異。另外5份標(biāo)本在"α"抗原決定簇內(nèi)出現(xiàn)了T126A.、I126T、Q129R、T140S變異，其中T140S這一變異在兩兄妹的標(biāo)本中同時(shí)出現(xiàn)。還有一份核心抗體單獨(dú)陽性的標(biāo)本，變異發(fā)生在"α"抗原決定簇以外的地方。另有5份標(biāo)本在MHC表位發(fā)生了

6、變異。在變異株中，有8份標(biāo)本的變異氨基酸發(fā)生了極性的改變，分析表明有5株病毒氨基酸極性增強(qiáng)，3株極性減弱，Anthepro軟件分析顯示4株病毒抗原性發(fā)生變異。二級(jí)結(jié)構(gòu)分析表明有11株病毒表面抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。在"α"決定簇和細(xì)胞表位內(nèi)出現(xiàn)氨基酸變化的毒株，其蛋白結(jié)構(gòu)都發(fā)生了變化。這些變化，除一株病毒發(fā)生在跨膜位置外，其余病毒的變化主要在β-折疊、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲部位。 本研究發(fā)現(xiàn)與我省普通乙肝病人中的基因型分布不同，在免疫失

7、敗兒童中病毒S基因以B基因型和adw血清型為主，但因?yàn)闆]有進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)資料，還不確定是否與疫苗的選擇作用相關(guān)。通常認(rèn)為"α"決定簇是高度保守的一段序列，但本研究發(fā)現(xiàn)在乙肝疫苗免疫失敗人群中，S基因"α"決定簇段變異頻率較其它部位高，可能這一片斷受到的免疫壓力較其它部分大。進(jìn)一步分析顯示，有部分氨基酸變異和二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，這種改變可能導(dǎo)致抗原與抗體或抗原遞呈細(xì)胞結(jié)合力減弱，病毒不能被完全中和或殺滅。研究中還發(fā)現(xiàn)一個(gè)家庭成員內(nèi)存在同一變異