巨細胞病毒感染合并肝損傷與乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的：
　　 由于巨細胞病毒感染可導(dǎo)致機體免疫功能下降，因此我們通過臨床與動物實驗共同研究探討圍生期與先天性巨細胞病毒感染合并肝臟損傷對乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果的影響及其發(fā)生機制。
　　 方法：
　　 臨床實驗方法
　　 選取我院巨細胞病毒感染患兒41例，平均年齡1月，所有患兒均于生后24小時內(nèi)接種乙肝疫苗。抽取空腹靜脈血檢測血清肝功生化;檢測結(jié)果有異常者歸為A組，即巨細胞病毒感染合并肝損傷組，共20例。檢查

2、結(jié)果無明顯異常者歸為B組，即巨細胞病毒感染無肝損傷組，共19例。選取健康小嬰兒，歸為C組，即正常對照組，共20例。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法檢測HCMV-IgM抗體及抗HBsAb滴度，熒光定量PCR技術(shù)檢測外周血淋巴細胞HCMV-DNA;流式分析技術(shù)檢測外周血淋巴細胞亞群。
　　 動物實驗方法
　　 取8-9周齡雌性SPF級大鼠30只，見栓孕鼠隨機分為實驗組和對照組，實驗組20只，對照組10只，于見栓后第2-5天分別腹腔內(nèi)接種HCM

3、V-AD169株病毒懸液0.1ml/只(6.0logTCID50/ml)，對照組腹腔內(nèi)接種等量的人胚肺細胞上清液，待其分娩后，所有新生鼠于生后24小時內(nèi)雙后肢肌內(nèi)接種乙肝疫苗，5μg/只。所有幼鼠于生后三周處死，收集血清檢測HCMV-IgM和肝功生化指標，留取肝臟做病理切片行HE染色。HCMV-IgM陽性、肝功生化結(jié)果或（和）肝臟HE染色結(jié)果異常者歸為A組，即巨細胞病毒感染合并肝損傷組，共81只;HCMV-IgM陽性、肝功生化結(jié)果和肝臟

4、HE染色結(jié)果均無異常者歸為B組，即巨細胞病毒感染無肝損傷組，共81只;正常對照組歸為C組，共83只。應(yīng)用ELISA方法檢測血清中抗HBsAb滴度、血清及肝組織中IL-2、IL-6的水平。
　　 結(jié)果：
　　 臨床實驗結(jié)果
　　 1.抗HBsAb滴度:A組:抗HBsAb滴度最低，檢測值為3.01±4.05mIU/ml，與B組及C組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，B組:抗HBsAb滴度為220.45±3.17mI

5、U/ml，與C組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）;C組:抗HBsAb滴度最高，檢測值為223.34±3.73mIU/ml。
　　 2.細胞免疫功能指標:A組:CD3+、CD4+、CD19+、NK細胞含量降低，CD8+細胞含量升高，CD4/CD8比值下降，與B組及C組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，B組與C組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 動物實驗結(jié)果
　　 1.抗HBsAb滴度:A組:抗HBsAb

6、滴度最低，檢測值為0.47±0.09U/ml，與B組及C組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);B組:抗HBsAb滴度介于A組與C組之間，檢測值為0.70±0.07U/ml，與C組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05），C組:抗HBsAb滴度最高，檢測值為0.73±0.09U/ml。
　　 2.血清IL-2和IL-6的水平:A組:血清IL-2的水平最低，檢測值為14.51±8.07ug/l，IL-6的水平最高，檢測值為7.25±3.7

7、7ng/l，與B組及C組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);B組:血清IL-2和IL-6的水平介于A組及C組之間，檢測值為18.78±8.00ug/l和2.88±1.26ng/l，與C相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);C組:血清IL-2的水平最高，檢測值為19.14±6.09ug/l，IL-6的水平最低，檢測值為2.69±0.46ng/l。
　　 3.肝組織IL-2和IL-6的水平:A組:肝組織中IL-2的水平最低，檢測值為1

8、2.64±7.36ug/l，IL-6的水平最高，檢測值為5.24±2.86ng/l，與B組及C組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);B組:肝組織中IL-2和IL-6的水平介于A組及C組之間，檢測值為15.45±6.10ug/l和3.05±2.76ng/l，與C組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);C組:肝組織中IL-2的水平最高，檢測值為16.14±7.48ug/l，IL-6的水平最低，檢測值為3.88±0.84ng/l。
　　

9、 4.HE染色結(jié)果:A組:HE染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝索解離，肝細胞腫脹、變性，肝細胞間可見淋巴細胞浸潤，肝竇內(nèi)明顯充血。B組和C組:HE染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細胞無腫脹及變性，未見淋巴細胞浸潤，肝竇無充血。
　　 結(jié)論：
　　 1.巨細胞病毒感染合并肝損傷可導(dǎo)致機體對乙肝疫苗免疫應(yīng)答效果的降低;
　　 2.巨細胞病毒感染合并肝損傷導(dǎo)致外周血淋巴細胞亞群數(shù)量異常，引起免疫功能紊亂;
　　 3.先天性