NF-κB介導CBS表達上調(diào)參與新生期母愛剝奪導致的成年大鼠內(nèi)臟痛覺過敏.pdf

1、目的:腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrom IBS）是以慢性內(nèi)臟痛覺過敏為特征，表現(xiàn)為持續(xù)性或是反復發(fā)生的腹痛和排便習慣的改變的一類綜合征。本實驗旨在研究內(nèi)源性H2S的合酶（Cystathionine-β-synthase CBS）和核轉(zhuǎn)錄因子kappa-B（Nuclear factor kappa B）在新生期母愛剝奪（Neonatal Maternal Deprivation NMD）導致的慢性內(nèi)臟痛覺過敏（

2、Chronic Visceral Hyperalgesia CVH）中的作用及其機制。
　　方法:1. CVH模型的建立：實驗選取新生的雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，在大鼠出生后第2～15天進行母愛剝奪實驗，視為實驗組（NMD），同期未進行隔離的大鼠作為對照組（CON）。
　　2.結(jié)直腸擴張試驗（Colorectal Distention CRD）：在大鼠7～15周齡進行，用來測定NMD及CON組大鼠結(jié)直腸的

3、痛閾以及注射藥物后大鼠的痛行為。
　　3.蛋白質(zhì)免疫印跡：提取大鼠的胸腰椎段（T13-L2）腸特異性脊髓背根神經(jīng)節(jié)（Dorsal Root Ganglion DRG）進行蛋白的定量分析，分別觀察CBS、NF-κB（胞漿內(nèi)、核內(nèi)）在CON和NMD組的表達，及NMD組大鼠在抑制NF-κB活化后CBS的表達。
　　4.全細胞膜片鉗技術(shù)：用來記錄對照組、實驗組及藥物處理后的大鼠腸特異性DRG（T13-L2）神經(jīng)元細胞的興奮性。

4、>　　結(jié)果:1.與CON組相比，NMD可以導致成年大鼠內(nèi)臟痛覺過敏。這種內(nèi)臟痛覺過敏在大鼠7、9、12周出現(xiàn)（P＜0.05），15周消失（P＞0.05）。與行為學結(jié)果一致的是我們發(fā)現(xiàn)CBS在NMD組的表達，與同齡CON組相比，同樣在7、9、12周升高（P＜0.05），15周沒有差異（P＞0.05）。
　　2.給NMD組大鼠注射CBS的拮抗劑AOAA（10、20mg/kg）與注射同容積的NS組相比，AOAA能抑制 NMD誘導的內(nèi)臟痛

5、覺過敏（P＜0.05），并表現(xiàn)出劑量及時間依賴性。而腹腔注射最優(yōu)劑量的 AOAA（10mg/kg）對 CON組大鼠痛閾無顯著影響（P＞0.05）。予NMD大鼠連續(xù)腹腔注射7天的AOAA（10mg/kg），能顯著地降低NMD組大鼠腸特異性神經(jīng)元的興奮性（P＜0.05），NMD組大鼠連續(xù)注射7天同容積的NS作為對照組。
　　3.予體外分離的正常大鼠腸特異性DRG神經(jīng)元灌注H2S的供體NaHS（250μM）可以顯著提高其興奮性（P＜0.

6、05）。在體內(nèi)，鞘內(nèi)注射NaHS（0.1nM、1nM）可以顯著降低正常大鼠的痛閾（P＜0.05），且表現(xiàn)出時間及劑量依賴性。
　　4.與對照組相比，NMD組大鼠NF-κB在胞漿內(nèi)的表達明顯減少（P＜0.05），同時我們檢測到在核內(nèi)，NF-κB在NMD組的表達明顯升高（P＜0.05）。連續(xù)腹腔注射7天的NF-κB拮抗劑PDTC后導致CBS表達明顯下降（P＜0.05），而鞘內(nèi)注射PDTC（1μg、10μg）可以提高NMD大鼠的痛閾（P