巢蛋白及NF-Κb P65在妊娠期甲亢大鼠子代腎臟中的表達.pdf

1、目的:妊娠合并甲狀腺功能亢進癥(hyperthyroidism，簡稱甲亢)的患病率高達0.2‰-2‰[1]。其過量的甲狀腺激素和多種甲狀腺自身抗體會通過胎盤[2]，造成早產、宮內生長遲緩等發(fā)生率明顯增高，影響到胎兒的生長發(fā)育，進而給子代各器官成熟造成嚴重的后果[3]。巢蛋白是第Ⅳ類中間絲的細胞骨架蛋白，在細胞骨架結構的組裝和調節(jié)方面發(fā)揮重要作用[4]。近年研究表明，巢蛋白主要表達在分化成熟的腎臟足細胞的胞質和初級足突中。氧化應激、缺血缺

2、氧因素等會導致其含量降低[5]。細胞核轉錄因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)在調節(jié)基因轉錄的啟動和速率方面發(fā)揮重要作用。NF-κB最主要的活化形式為NF-κBP65-P50組成的二聚體[6]。正常情況下，NF-κBP65只存在與胞質中，細胞核內很少表達。缺血缺氧、氧化應激等因素可使NF-κB發(fā)生核轉位，使其在細胞核的含量增加[7]。通過測定妊娠合并甲亢大鼠子代腎臟巢蛋白和腎小管間質細胞胞核中NF-κBP65

3、的表達，探討妊娠合并甲亢對子代腎臟的影響，進而為子代腎臟疾病的預防和治療提供理論基礎。
　　 方法:將雌性SD大鼠隨機分成正常對照組（N組）、輕度甲亢組(A組)和重度甲亢組（B組）。予A組及B組大鼠不同劑量的左甲狀腺素鈉灌胃制造甲亢模型，正常對照組灌等量的生理鹽水，連續(xù)灌胃21天。造模成功后按雌雄比例2∶1，與雄性SD大鼠合籠。大鼠受孕后繼續(xù)灌胃，直至分娩。觀察母鼠及仔鼠的一般性狀。測定仔鼠0天、21天及60天時體重(body

4、weight，BW)、腎臟重量（kidney weight，KW）及觀察仔鼠腎臟HE染色病理結構。觀察21天透射電鏡腎臟超微結構。測定仔鼠21天及60天甲狀腺功能、腎功能。應用westernblot技術測定仔鼠三個時期足細胞中巢蛋白及腎小管間質細胞胞核中NF-κBP65的表達含量。
　　 結果:
　　 1、母鼠的一般狀況與甲功
　　 1.1、母鼠的一般性狀
　　 輕度甲亢組的母鼠活動量、飲食量及飲水量較正

5、常對照組稍增加，對外界刺激反應敏感，大小便增多;重度甲亢組與較正常對照組比較，上述變化更明顯。
　　 1.2、母鼠甲狀腺功能
　　 隨著左甲狀腺素鈉劑量的增加，F(xiàn)T3、FT4呈明顯升高趨勢;TSH呈明顯下降趨勢。
　　 2、仔鼠一般狀況、甲狀腺功能及腎功能
　　 2.1、仔鼠一般性狀
　　 正常對照組的仔鼠發(fā)育良好，絨毛顏色為純白色且較豐滿。輕度甲亢組與重度甲亢組的仔鼠較正常對照組絨毛生長速度緩慢

6、，色澤發(fā)暗，每日飲食量及飲水量增加，且重度甲亢組仔鼠表現(xiàn)更為突出。
　　 2.2、仔鼠甲功的比較
　　 2.2.1、各組仔鼠甲功的比較
　　 21天時，輕度甲亢組和重度甲亢組中的仔鼠血清中FT3、FT4的含量較正常對照組升高，TSH較正常對照組降低，重度甲亢組中的仔鼠血清FT3、FT4較輕度甲亢組升高，TSH較輕度甲亢組減低。60天時輕度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較正常對照組升高，血清中TSH的含量較正常對照

7、組減低，重度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較正常對照組升高，血清TSH較正常對照組減低。重度甲亢組仔鼠血清中FT3、FT4較輕度甲亢組升高，TSH比輕度甲亢組減低。
　　 2.2.2、仔鼠不同時期甲功的變化
　　 正常對照組，60天時仔鼠血清中FT3、FT4與21天時比較，無統(tǒng)計學差異。輕度甲亢組仔鼠60天時，血清FT3、FT4與21天時比較，呈現(xiàn)降低趨勢，有統(tǒng)計學差異，血清TSH較21天時升高，有統(tǒng)計學意義。重度甲亢組

8、60天時血清FT3、FT4與21天比較，呈現(xiàn)降低趨勢，但無統(tǒng)計學意義，血清TSH比21天時升高，無統(tǒng)計學差異。
　　 2.3、仔鼠腎功能
　　 21天時，輕度甲亢組和重度甲亢組仔鼠血清BUN及Cr含量較正常對照組明顯增高，且重度甲亢組仔鼠血清中BUN及Cr含量較輕度甲亢組明顯增高。60天時，輕度甲亢組和重度甲亢組仔鼠血清中BUN及Cr含量較正常對照組明顯增高，重度甲亢組仔鼠血清BUN及Cr的含量較輕度甲亢組明顯升高。正常

9、對照組21天與60天比較，血清BUN及Cr無明顯的差別。輕度甲亢組60天與21天比較，血清BUN及Cr有明顯的升高的趨勢;重度甲亢組60天與同組21天比較，BUN及Cr有明顯升高的趨勢。
　　 3、仔鼠體重、腎臟總重量、HE染色及電鏡透射的結果
　　 3.1、仔鼠三個時期的體重的比較
　　 0天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對照組明顯降低，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低。21天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔

10、鼠體重較正常對照組低，有統(tǒng)計學意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，有統(tǒng)計學意義。60天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對照組低，有統(tǒng)計學意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，有統(tǒng)計學意義。
　　 3.2、仔鼠三個時期腎臟總重量的比較
　　 0天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠腎重較正常對照組低，具有統(tǒng)計學意義，重度甲亢組較輕度甲亢組腎重低，具有統(tǒng)計學意義。21天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對照組低，具有統(tǒng)

11、計學意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，具有統(tǒng)計學意義。60天時，輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠體重較正常對照組低，具有統(tǒng)計學意義，重度甲亢組較輕度甲亢組體重低，具有統(tǒng)計學意義。
　　 3.3、仔鼠腎臟HE染色結果
　　 正常對照組、輕度甲亢組及重度甲亢組仔鼠0天腎組織尚未發(fā)育完全，腎系膜細胞及內皮細胞較少，腎小球體積較小，無明顯的差別。輕度甲亢組仔鼠21天與同期較正常對照組比較，腎小管及腎小球結構稍紊亂，基底膜稍增厚，內皮

12、細胞無水腫等異常;重度甲亢組21天腎組織排列異常紊亂，有大量紅細胞的浸潤，充血水腫較明顯，基底膜增厚明顯，基質增多。輕度甲亢組60天腎組織纖維組織稍增生，纖維化較正常組同期明顯。內皮細胞及系膜細胞水腫及體積增大。重度甲亢組60天腎組織纖維組織明顯增生，纖維化明顯。內皮細胞及系膜細胞水腫及體積增大，大量炎性細胞的浸潤。
　　 3.4、仔鼠21天時腎臟透射電鏡結果
　　 正常組21天仔鼠腎小球足細胞結構排列完整，足突排列清晰

13、整齊;輕度甲亢組21天仔鼠腎小球基底膜輕度增厚，且厚薄不均勻，毛細血管窗孔不均勻增大;重度甲亢組21天仔鼠腎臟足細胞明顯腫脹，足細胞線粒體鞘部分或大部分融合，部分膜融合或消失，系膜細胞和內皮細胞腫脹明顯，系膜基質增多，毛細血管孔窗徑明顯增加。
　　 4、仔鼠足細胞中巢蛋白的表達量
　　 0天時輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋白表達較正常對照組顯著降低，重度甲亢組較輕度甲亢組巢蛋白表達顯著降低。21天時輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋

14、白較正常對照組顯著降低，且重度甲亢組巢蛋白表達較輕度甲亢組顯著降低。60天時，輕度甲亢組和重度甲亢組巢蛋白較正常對照組顯著降低，60天時重度甲亢組巢蛋白較輕度甲亢組顯著降低。正常對照組仔鼠0天、21天和60天時，巢蛋白表達無明顯的差別。輕度甲亢組21天及60天巢蛋白表達較0天均明顯降低，60天時較21天時巢蛋白的表達明顯降低。重度甲亢組21天及60天巢蛋白表達較0天均明顯降低，60天較21天表達明顯降低。
　　 5、腎小管間質細

15、胞胞核中NF-κBP65的表達量
　　 0天時輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65表達較正常對照組顯著增高，重度甲亢組較輕度甲亢組NF-κBP65表達顯著增高。21天時輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65較正常對照組顯著增高，且重度甲亢組NF-κBP65表達較輕度甲亢組顯著增高。60天時，輕度甲亢組和重度甲亢組NF-κBP65較正常對照組顯著增高，60天時重度甲亢組NF-κBP65較輕度甲亢組顯著增高。正常對照組仔鼠0天、2

16、1天和60天時，NF-κBP65表達無明顯的差別。輕度甲亢組21天及60天NF-κBP65表達較0天均明顯增高，60天較21天表達明顯增高。重度甲亢組21天及60天NF-κBP65表達較0天均明顯增高，60天較21天表達明顯增高。
　　 結論:
　　 1、母鼠妊娠期間患有甲狀腺功能亢進癥，會造成對子代甲狀腺功能亢進。且甲亢嚴重程度與子代腎臟損傷成正相關。輕度甲亢會隨著時間的推移，會恢復正常。重度甲亢隨著時間的推移，甲狀腺