雌激素在新生期結(jié)直腸炎癥誘導(dǎo)的成年大鼠慢性內(nèi)臟痛過敏中的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　腸易激綜合征（irritable bowel syndrome,IBS）患者的慢性腹痛、腹部不適等癥狀是臨床醫(yī)生所面臨的一大挑戰(zhàn)。IBS在女性人群中的發(fā)病率是男性人群中的2-3倍，但是造成這種性別差異的機(jī)制尚未明確。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究雌激素是否參與新生期結(jié)直腸炎癥（neonatal colonic inflammation,NCI）介導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛覺過敏（chronic visceral hyperalgesia,CVH）

2、的形成過程，及雌激素是否對(duì)腸相關(guān)的脊髓背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion,DRG）的P2X3及胱硫醚-β-合成酶（cystathionine-β-synthase,CBS）的表達(dá)構(gòu)成影響。
　　方法:
　　1，慢性內(nèi)臟痛覺過敏及去卵巢模型的制備內(nèi)臟痛覺過敏模型是通過向出生第10天的雌性大鼠的直腸內(nèi)注入濃度為0.5%的稀乙酸，待大鼠成年時(shí)行卵巢摘除術(shù)（ovariectomy,OVX）等操作。
　　2，通

3、過結(jié)直腸擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)（colorectal distension,CRD）觀察腹壁撤回反射（abdominal withdrawal reflex,AWR）的表現(xiàn)來測(cè)量大鼠的行為學(xué)改變。
　　3，用蛋白質(zhì)免疫印跡分析法（western blotting,WB）觀察分子的表達(dá)變化。首先提取腸相關(guān)的脊髓背根神經(jīng)節(jié)（DRG），然后用蛋白質(zhì)免疫印跡分析法分析P2X3與CBS等分子表達(dá)的改變。
　　4，細(xì)胞學(xué)檢測(cè)用雌激素等藥品孵育DRG神

4、經(jīng)元，并分析P2X3及CBS表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.NCI組雌性大鼠在結(jié)直腸擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)（CRD）中在20,40,60,80mmHg壓力下的AWR評(píng)分明顯較對(duì)照組升高。我們觀察到，這種效應(yīng)在7-11周時(shí)較明顯（p<0.05），在大鼠12周時(shí)這種差異消失（p>0.05）。
　　2.NCI組大鼠行去卵巢手術(shù)（OVX）后，其行為學(xué)AWR評(píng)分較手術(shù)前明顯降低，對(duì)照組（CON）大鼠行卵巢摘除術(shù)后則無此效應(yīng)。去卵巢手術(shù)的NC

5、I大鼠在每日給予雌激素（OVX+E2）后，其AWR評(píng)分明顯高于NCI大鼠去卵巢后僅給予溶劑的對(duì)照組（OVX）大鼠。
　　3.NCI組大鼠DRG中P2X3及CBS的表達(dá)量明顯較對(duì)照組CON升高。NCI大鼠去卵巢手術(shù)后P2X3及CBS的表達(dá)量均下降，每日給予雌激素維持的實(shí)驗(yàn)組去卵巢大鼠（OVX+E2）DRG中的P2X3及CBS表達(dá)量明顯較去卵巢的實(shí)驗(yàn)組大鼠（OVX）升高。
　　4.NCI大鼠DRG中P2X3的水平在腹腔注射CBS

6、的拮抗劑o-（羧甲基）羥胺半鹽酸鹽（O-（carboxymethyl）hydroxylamine hemihydrochloride AOAA）后會(huì)出現(xiàn)明顯的降低。經(jīng)硫氫化鈉（NaHS，H2S的供體）孵育過的T13-L2節(jié)段脊髓背根神經(jīng)節(jié)（DRG）神經(jīng)元的P2X3水平較對(duì)照組明顯升高。孵育雌激素的T13-L2節(jié)段的DRG神經(jīng)元的P2X3和CBS的表達(dá)水平較對(duì)照組細(xì)胞明顯升高，但若在孵育雌激素前先用AOAA孵育細(xì)胞后，P2X3表達(dá)升高的現(xiàn)