載表阿霉素納米微粒制備及抗胰腺癌作用的研究.pdf

1、胰腺癌是一種惡性程度極高的消化道常見腫瘤，其發(fā)病率近年來在世界范圍內(nèi)有逐年增高的趨勢，早期癥狀不典型，確診時大多數(shù)患者已屬中晚期，雖然手術(shù)是治療胰腺癌的根本手段，但目前胰腺癌手術(shù)切除率僅為5％～15％，因此局部或全身化療仍是治療胰腺癌的重要手段之一。然而，傳統(tǒng)的化療藥物大多具有特異性較差、體內(nèi)半衰期較短的缺點，應(yīng)用后常會引起較大的不良反應(yīng)。近年來由于納米技術(shù)的飛速發(fā)展，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用也日益得到了人們的重視，尤其表現(xiàn)在研制抗腫瘤藥物新劑

2、型方面。 載藥納米微粒為延長化療藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，減輕化療過程中的毒副作用，增加藥物對腫瘤組織的靶向性提供了一種可能，是一種新型的藥物緩釋系統(tǒng)。用于制備載藥納米微粒的載體材料主要有無機(jī)非金屬和有機(jī)高分子兩大類。生物降解性是藥物納米載體的重要特征之一，瓜爾膠和海藻酸鈉均為天然生物大分子，具備良好的生物相容性和生物降解性，降解后在體內(nèi)幾乎沒有毒性，因此在載藥納米微料的制備中顯現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。 目前常用的載藥納米微粒的

3、制備方法如超聲乳化法、氧化還原法等，大多需要在較苛刻的制備條件如存在乳化劑、有機(jī)溶劑和超聲振蕩下進(jìn)行，且不易通過反應(yīng)條件的優(yōu)化調(diào)控納米微粒的大小，因此在實際應(yīng)用上受到一定程度的限制。而本研究所使用的聚電解質(zhì)復(fù)合法，制備條件溫和，操作簡便，不需要有機(jī)溶媒，模型藥物選擇廣泛，尤其對難溶性藥物及大分子藥物該載體更有得天獨厚的優(yōu)勢。 根據(jù)以上內(nèi)容，本文擬從以下幾個方面進(jìn)行研究： 1、以陽離子瓜爾膠(guargum)和海藻酸鈉(s

4、odiumalginate)為載體材料，以表阿霉素(E-ADM)為模型藥物，采用聚電解質(zhì)復(fù)合法制備載表阿霉素納米微粒(E-ADM-NPs)。對E-ADM-NPs的形貌、粒徑分布、體外釋藥及在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)情況進(jìn)行考察。 2、采用四唑鹽顯色法(MTT法)評價E-ADM-NPs對胰腺癌細(xì)胞增殖的影響，考察E-ADM-NPs對胰腺癌細(xì)胞株增長的抑制效果。 3、建立裸鼠人胰腺癌腫瘤移植模型，考察E-ADM-NPs對裸鼠人胰

5、腺癌腫瘤移植模型的治療效應(yīng)及相關(guān)的毒副作用。 第一部分載表阿霉素納米微粒的制備及藥理學(xué)研究 研究內(nèi)容與方法： 醫(yī)用納米控釋系統(tǒng)作為藥物傳遞和控釋的載體，是一種新型的控釋體系。它具有超微小體積，能穿過細(xì)胞間隙并被細(xì)胞攝取，如可通過毛細(xì)血管間隙和血腦屏障，因而作為一種新的控釋體系而被廣泛研究，具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究制備并對E-ADM-NPs的表面形貌、粒徑分布、體外釋藥及在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)情況進(jìn)行考察與評價。

6、以陽離子瓜爾膠和海藻酸鈉為載體材料，表阿霉素為模型藥物，采用聚電解質(zhì)復(fù)合法制備E-ADM-NPs，在掃描電鏡下觀察其微觀形態(tài)，在動態(tài)光散射粒子分析儀下測定粒徑大小，用紫外分光光度計測得E-ADM-NPs的載藥量及包封率，并觀察其在體內(nèi)外的釋藥過程，計算藥代動力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果： E-ADM-NPs在掃描電鏡下大部分呈規(guī)則的球形，大小較均勻，表面光滑，分散性良好，高倍掃描電鏡顯示E-ADM-NPs呈核—殼型結(jié)構(gòu)。動態(tài)光散射法

7、測定其平均粒徑為(185±23)nm。E-ADM-NPs的載藥量為(26.3±4.6)％，包封率為(76.2±6.5)％。體外釋藥實驗表明E-ADM-NPs具有緩釋性，10天的累積釋藥量達(dá)92.46％。在大鼠體內(nèi)E-ADM-NPs組血藥峰濃度明顯低于E-ADM組(P＜0.05)，藥物在血液中的滯留時間明顯長于E-ADM組(P＜0.05)。 結(jié)論： 以陽離子瓜爾膠和海藻酸鈉為載體材料，采用聚電解質(zhì)復(fù)合法制備E-ADM-NP

8、s，該納米微粒成球性好，大小均一，粒徑適當(dāng)，具有較好的載藥量和包封率。E-ADM-NPs在體外具有良好的緩釋性，可降低E-ADM在大鼠體內(nèi)的峰濃度，延長E-ADM在血液中的滯留時間。 第二部分E-ADM-NPs對人胰腺癌細(xì)胞株體外殺傷效應(yīng)的研究 研究內(nèi)容與方法： 用MTT法檢測不同劑量的E-ADM-NPs和E-ADM在1～10d內(nèi)10個時間點對胰腺癌細(xì)胞株的生長抑制作用，計算出兩組藥物在各時間點對癌細(xì)胞生長的抑制

9、率以及藥物半數(shù)抑制率的濃度。 結(jié)果： E-ADM-NPs及E-ADM對胰腺癌細(xì)胞的體外殺傷效應(yīng)呈時間和劑量依賴關(guān)系。與E-ADM相比，E-ADM-NPs具有較強(qiáng)的抑制胰腺癌細(xì)胞生長的作用，兩者之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論： 模型藥物E-ADM經(jīng)聚電解質(zhì)復(fù)合法制備成納米微粒后其體外抗癌作用明顯增強(qiáng)。 第三部分E-ADM-NPs對荷人胰腺癌裸鼠的治療效果及毒副作用研究 研究

10、內(nèi)容與方法： 建立裸鼠人胰腺癌腫瘤移植模型，觀察E-ADM-NPs對裸鼠人胰腺癌腫瘤移植模型的治療效應(yīng)，并考察和評價E-ADM-NPs的骨髓抑制、肝腎損害等不良反應(yīng)。 結(jié)果： 空白對照組(NS組)、E-ADM-NPs組和E-ADM組的抑瘤率分別為0、68.71％和42.87％。E-ADM-NPs組的血白細(xì)胞(WBC)計數(shù)明顯高于E-ADM原藥組(P＜0.05)，而谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及肌酐(CR)水平與NS組相比