靶向載藥納米粒子的制備及對(duì)胰腺癌細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胰腺癌是一種預(yù)后極差的惡性腫瘤，目前就胰腺癌的早期診斷及綜合治療投入巨大但效果甚微?；熥鳛橐认侔┲委煹闹匾侄沃皇艿綇V泛重視，但其生物利用度差及全身毒性等不足嚴(yán)重影響其療效。納米技術(shù)可以有效彌補(bǔ)以上不足。表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growthfactor receptor，EGFR)在胰腺癌中呈過表達(dá)狀態(tài)，因此可將其作為分子靶向劑標(biāo)記于納米粒子表面從而達(dá)到胰腺癌細(xì)胞靶向識(shí)別治療的目的。本研究中我們將展示一個(gè)以納米粒子為基

2、礎(chǔ)的用于胰腺癌治療且逐步發(fā)展的遞送系統(tǒng)。
　　本實(shí)驗(yàn)中通過調(diào)控納米粒子制備過程的溫度、攪拌速度、穩(wěn)定劑及原料劑量等條件制備出粒徑分別為(25±7.6) nm，(49±8.6) nm，(88±20.5) nm，(145±13.5) nm，(205±8.4) nm的5種負(fù)載吲哚青綠的聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子（Polybutylcyanoacrylatenanoparticles carrying Indocyanine green，

3、ICG-PBCA-NPs）。利用紫外/可見光分光光度計(jì)測(cè)定并繪制吲哚青綠（Indocyanine green，ICG）溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。選取健康雄性小鼠隨機(jī)分為7組，每組小鼠分別于給藥1，5，12h后處死，解剖獲得心、肝、脾、腎和胰腺樣品并制作成冰凍切片用于熒光觀察。另外，將給藥0.5，1，5和12h后的心、肝、脾、腎和胰腺樣品制備成勻漿，離心后以紫外可見光分光光度計(jì)測(cè)定ICG的A值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相應(yīng)ICG濃度。結(jié)果均發(fā)現(xiàn)(25±7.

4、6)nm組于小鼠各組織中無明顯分布。胰腺組織于(49±8.6) nm粒子組熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于其他各組，肝臟、脾臟于納米粒徑為(145±13.5)nm時(shí)出現(xiàn)最強(qiáng)熒光。心臟熒光強(qiáng)度隨粒徑變化不大且較弱。另外，隨著粒徑減小ICG-PBCA-NPs在各組織中最強(qiáng)熒光出現(xiàn)時(shí)間縮短。
　　在以上研究基礎(chǔ)上通過乳化聚合法制備粒徑大小約為50nm的負(fù)載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子（Polbutylcyanoacrylatenanoparti

5、cles carrying5-fluorouracil，5-Fu-PBCA-NPs）及偶聯(lián)抗EGFR單抗的負(fù)載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(EGFR-graftedpolybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying5-fluorouracil,5-Fu-EGFR-NPs)。然后運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)5-Fu-EGFR-NPs中抗體活性。通過MTT比色法檢測(cè)50，40，30，20，10，5

6、ug·mL-1濃度下PBCA-NPs組、5-Fu-PBCA-NPs組、5-Fu-EGFR-NPs及五氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-Fu)原藥組在12，24，48h對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生存率的抑制作用。結(jié)果提示聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(polybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying5-fluorouracil,PBCA-NPs)具有一定的安全性;經(jīng)靶向抗體抗EGFR單抗修飾后的5-Fu

7、-EGFR-NPs與5-Fu-PBCA-NPs比較于24h時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，48h時(shí)顯示出明顯差異(P＜0.01);5-Fu裸藥組12，24h時(shí)抑瘤效果強(qiáng)于5-Fu-PBCA-NPs組(P＜0.05，P＜0.01)，然而當(dāng)作用48h后5-Fu裸藥組的抑瘤效果明顯弱于5-Fu-PBCA-NPs組(P＜0.01);另外5-Fu-PBCA-NPs，5-Fu-EGFR-NPs及5-Fu三組抑瘤率均顯示出劑量依賴性。