南瓜蛋白對(duì)人胰腺癌細(xì)胞增殖抑制作用及對(duì)細(xì)胞EGFR的影響.pdf

1、目的：研究南瓜蛋白(cucurmosin，CUS)對(duì)人胰腺癌(Pancreatic Cancer，PC)細(xì)胞株的增殖抑制作用和對(duì)細(xì)胞重要分子EGFR的影響，以及CUS聯(lián)合吉非替尼（Gefitinib，GEF）對(duì)胰腺癌細(xì)胞株的作用；探討CUS對(duì)人胰腺癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制，為CUS可能的抗胰腺癌臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1.采用SRB法測(cè)定CUS單用及其與GEF聯(lián)用對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞的

2、增殖抑制作用。
　　2.集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定CUS單用及其與GEF聯(lián)用對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞集落形成的影響。
　　3.Western-blot技術(shù)檢測(cè)CUS單用以及與GEF聯(lián)用對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞EGFR的影響,CUS對(duì)細(xì)胞EGFR下游通路蛋白表達(dá)的影響。
　　4. RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CUS作用于體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞對(duì)EGFR mRNA

3、的影響。
　　結(jié)果：1.SRB法結(jié)果顯示，CUS對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞具有顯著的增殖抑制作用，并呈明顯的劑量依賴性和時(shí)間依賴性。CUS對(duì)PANC-1細(xì)胞作用24h、48h和72h的IC50分別為(12.50±0.012)μmol/L、(0.2678±0.020)μmol/L和(0.0677±0.018)μmol/L；CUS對(duì)BxPC-3細(xì)胞作用24h、48h和72h的IC50分別為(7.88±0.035

4、)μmol/L、(0.7638±0.026)μmol/L和(0.2935±0.023)μmol/L。
　　2.集落形成實(shí)驗(yàn)表明隨著隨著濃度的增加CUS對(duì)人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞集落形成抑制率逐漸增加，呈明顯劑量依賴性。當(dāng)CUS濃度為0.025μmol/L時(shí)對(duì)PANC-1細(xì)胞集落形成抑制率為92.37％；當(dāng)CUS濃度為0.05μmol/L時(shí)對(duì)BxPC-3細(xì)胞集落形成抑制率為82.39%。
　　3.不同濃度CUS分

5、別作用于人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞72h后對(duì)上述細(xì)胞EGFR蛋白表達(dá)的水平均有下調(diào)作用，呈劑量依賴性，而對(duì)EGFR mRNA的表達(dá)水平均無(wú)明顯影響；CUS亦可下調(diào)EGFR下游Ras/Raf通路及PI3K/Akt通路蛋白的表達(dá)水平。
　　4. CUS聯(lián)合GEF作用人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞與各自藥物單用相比具有以下結(jié)果：①聯(lián)合用藥組對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率大于各自藥物單用組，q>0.85；②聯(lián)合用藥組可明顯下調(diào)細(xì)胞

6、EGFR蛋白表達(dá)，q>1.15。③聯(lián)合用藥組的集落形成抑制率大于各自藥物單用組，q＞1.15；
　　結(jié)論：1.CUS對(duì)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，呈時(shí)間依賴性和劑量依賴性。
　　2.CUS可明顯下調(diào)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細(xì)胞EGFR蛋白的表達(dá)水平，但對(duì)EGFR mRNA水平上卻未見(jiàn)明顯影響，提示CUS僅通過(guò)干擾蛋白翻譯的階段而發(fā)揮作用；并且CUS也可抑制細(xì)胞E