DNT細胞對胰腺癌體內(nèi)、外生長的抑制作用及其機制的實驗研究.pdf

1、胰腺癌(Pancreatic Carcinoma,PC)是一種惡性程度極高的消化道腫瘤,由于其發(fā)生部位特殊,位于腹部深處、發(fā)病隱匿,確診時常常晚期;再加上其生物學特性具有易發(fā)生局部浸潤(如侵犯周邊血管、淋巴結(jié)、神經(jīng)等)和遠處轉(zhuǎn)移的特點,胰腺癌已經(jīng)越來越成為困擾人類健康甚至威脅生命的殺手。近年來胰腺癌發(fā)病率與死亡率逐年增高,怎樣提高早期診斷與有效治療越來越成為臨床研究的重點。近幾年,隨著免疫學的不斷發(fā)展,一些腫瘤學家開始把免疫療法作為治療

2、癌癥的新方法。其中CD4-CD8-T(double negative T cell,DNT)細胞作為一種特殊的調(diào)節(jié)性T細胞,在正常人的外周血約占總淋巴細胞含量的1-5％,該細胞表面表達Fas/FasL、TNF/TNFR,CD3+、CD4-、CD8-、MHCⅠ等表型。研究表明DNT細胞在免疫調(diào)節(jié)、免疫抑制、自身免疫及抗腫瘤方面發(fā)揮重要作用。
　　本研究通過從人外周血中分離、擴增DNT細胞,使用流式細胞儀實驗方法定性,利用MTT及裸鼠

3、動物實驗從體內(nèi)、體外兩方面驗證DNT細胞對人胰腺癌細胞的抑制作用;同時通過PCR技術(shù),探索DNT細胞抑制腫瘤細胞生長的作用機制,為利用免疫學手段治療胰腺癌奠定基礎。
　　目的:
　　探討CD4-CD8-double negative T(DNT)細胞對體內(nèi)、外胰腺癌生長的抑制效應及其作用機制,為利用免疫學手段治療胰腺癌提供理論實驗依據(jù)。
　　方法:
　　利用抗體吸附法從人外周血分離、擴增、培養(yǎng)DNT細胞。采用四甲

4、基偶氮唑鹽法檢測DNT細胞對人胰腺癌細胞株P(guān)anc-1生長的影響。將18只裸鼠隨機分成3組,其中前兩組皮下注射Panc-1細胞以建立荷瘤鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,第3組注射DNT與Panc-1細胞按數(shù)量5:1共培養(yǎng)后的混細胞懸液。前兩組待成瘤后,再隨機分為對照組和治療組。對照組每日給予等量蒸餾水口服,治療組予塞來昔布4 mg/d口服。每2周測量裸鼠腫瘤體積一次,描繪腫瘤生長曲線。治療結(jié)束后處死裸鼠,剝除瘤組織,測量腫瘤體積并計算抑瘤率。

5、通過PCR途徑檢測DNT細胞作用于胰腺癌細胞后,胰腺癌細胞表面Fas/FasL基因的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)四甲基偶氮唑鹽結(jié)果顯示:DNT細胞能在體外抑制人胰腺癌細胞株P(guān)anc-1的生長,且DNT細胞對胰腺癌細胞的生長抑制呈劑量依賴性;
　　(2)DNT細胞能夠干預人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生長;
　　(3)PCR結(jié)果顯示:Fas基因表達上調(diào)、FasL基因表達下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　DNT細胞能夠