阿霉素載藥膠束的制備及體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、肺癌是當(dāng)今世界上嚴(yán)重威脅人類健康和生命的肺部最常見的惡性腫瘤，其中約85％為非小細胞肺癌(NSCLC)?；熓悄壳澳[瘤主要治療手段之一。阿霉素(Doxorubicin，DOX)是目前臨床常用的蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，然而該類藥物毒性較大，長期應(yīng)用可發(fā)生劑量依賴性的不可逆的心肌病變，骨髓抑制，脫發(fā)，消化道癥狀等，同時其多藥耐藥性的存在也使其在臨床的應(yīng)用受到一定限制。
　　目前，載體給藥系統(tǒng)，例如脂質(zhì)體、納米粒和聚合膠束等作為一種新型的MD

2、R逆轉(zhuǎn)策略被認為是最有效的途徑，已經(jīng)在臨床上取得了可喜的進展。作為載體給藥系統(tǒng)的一員，從兩親性嵌段共聚物發(fā)展而來聚合物膠束，近十年來深受青睞。當(dāng)投入到水性介質(zhì)中時，在體系自由能降低的驅(qū)動下，膠束的疏水段自發(fā)聚集在一起形成微粒的內(nèi)核。它既可以作為很多難溶性藥物的微儲庫，又能避免藥物在生物體內(nèi)環(huán)境中失活。自組裝形成的載藥膠束是熱力學(xué)、動力學(xué)穩(wěn)定的體系，具有穩(wěn)定、長效、安全等許多優(yōu)良的性質(zhì)，使得聚合物膠束成為難溶性藥物理想的輸送系統(tǒng)，且在藥物

3、釋放、基因載體和診斷制劑等很多方面得到廣泛地應(yīng)用。
　　研究目的：
　　本課題以聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)，聚己酸內(nèi)酯(polycaprolactone，PCL)和普朗尼克P105為高分子材料，采用溶劑揮發(fā)法制備阿霉素載藥膠束，并對阿霉素載藥膠束的體外抗腫瘤活性進行研究。
　　研究方法：
　　1.采用三種不同的高分子聚合物，聚乙二醇，聚己酸內(nèi)酯和普朗尼克P105，阿霉素為模型藥物，

4、溶劑揮發(fā)法制備阿霉素載藥膠束及空白膠束。共聚物膠束在水中的粒徑分布采用動態(tài)光散射粒徑測定儀(DLS)進行測定。共聚物膠束的形態(tài)通過透射電鏡(TEM)觀察，HPLC法測定阿霉素載藥膠束中阿霉素的含量。
　　2.溴化四氮唑藍(MTT)法測定阿霉素和阿霉素載藥膠束對肺癌細胞系A(chǔ)549的抑制作用，并通過繪制細胞生長抑制曲線，來判別細胞毒作用的強弱。
　　3.阿霉素具有熒光性，我們利用流式細胞術(shù)和激光共聚焦研究A549細胞對阿霉素和阿

5、霉素載藥膠束的攝取和滯留。
　　4.細胞吸收阿霉素載藥膠束后，為了更精確觀察藥物在細胞內(nèi)的分布，我們分別用Hoechst33342，MitoTracker Deep Red FM及LysoTracker Blue DND-22對細胞核、線粒體、溶酶體進行染色，采用激光共聚焦顯微鏡分析阿霉素載藥膠束的細胞核及亞細胞結(jié)構(gòu)的靶向分布。
　　5.通過克隆形成實驗評價阿霉素載藥膠束較阿霉素的放療增敏效應(yīng)。
　　研究結(jié)果：

6、　　1.透射電鏡觀察結(jié)果顯示，阿霉素載藥膠束及空載體膠束，粒子呈球型，顆粒狀，無粘連。膠束的粒徑多在100-200 nm。高效液相色譜法(high performanceliquid chromatograph，HPLC)測得樣本在1.11-111μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，從而測出阿霉素載藥膠束中藥物濃度。
　　2.阿霉素載藥膠束的抗腫瘤活性比普通阿霉素明顯增強?？瞻譖EG-PCL/P105聚合物膠束對細胞幾乎沒有毒性，說

7、明阿霉素載藥膠束是通過阿霉素，而并非藥物載體起到抗腫瘤的作用。
　　3.流式及激光共聚焦檢測細胞對藥物的攝取及滯留。結(jié)果顯示在阿霉素藥物濃度相同時，相同作用時間下，阿霉素載藥膠束比普通阿霉素更容易被細胞攝取，阿霉素載藥膠束在細胞內(nèi)滯留時間明顯延長。
　　4.阿霉素載藥膠束和普通阿霉素的亞細胞定位大致相同。藥物的紅色熒光和LysoTracker Blue DND-22染色劑的熒光信號部分重疊，和MitoTracker Deep

8、 Red FM染色劑的熒光信號完全重疊，和Hoechst33342染色的熒光信號不重疊。實驗結(jié)果證明細胞吸收阿霉素載藥膠束或者阿霉素后，可以通過溶酶體途徑轉(zhuǎn)運。
　　5.與單純放療組相比，普通阿霉素或阿霉素載藥膠束聯(lián)合放療組細胞生存曲線斜率更低。因此，阿霉素與阿霉素載藥膠束都具有放療增敏作用。同時，與放療聯(lián)合普通阿霉素組相比，放療聯(lián)合阿霉素載藥膠束組對腫瘤細胞的放療增敏效應(yīng)更強。
　　結(jié)論：
　　我們采用三種不同的高分

9、子聚合物，聚乙二醇(PEG)，聚己酸內(nèi)酯(PCL)和普朗尼克P105，阿霉素為模型藥物，制備合成了阿霉素載藥膠束。通過細胞實驗驗證所制備的納米膠束給藥系統(tǒng)的體外抗腫瘤活性。MTT結(jié)果證明阿霉素載藥膠束的抗腫瘤活性比普通阿霉素明顯增強而且空白PEG-PCL/P105聚合物膠束對細胞幾乎沒有毒性;流式細胞儀及激光共聚焦結(jié)果均表明阿霉素載藥膠束較普通阿霉素更易被細胞攝取，在細胞內(nèi)滯留時間延長;采用激光共聚焦手段測定阿霉素及阿霉素載藥膠束亞細胞