p300通過(guò)激活RASSF2基因表達(dá)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞HGC-27細(xì)胞周期S-G2阻滯的分子機(jī)制.pdf

1、抑癌基因RASSF2由于啟動(dòng)子處DNA超甲基化而導(dǎo)致的基因沉默與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300能夠激活胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞中RASSF2基因的表達(dá)并誘導(dǎo)細(xì)胞晚期凋亡，從而抑制細(xì)胞增殖。已知RASSF2基因?qū)?xì)胞增殖的抑制機(jī)制包括細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯兩種途徑。而p300激活RASSF2對(duì)胃癌細(xì)胞周期的影響及作用機(jī)制目前還未見(jiàn)報(bào)道。
　　本論文中，通過(guò)集落形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p300能夠抑制胃癌細(xì)胞H

2、GC-27的增殖，而該抑制作用可以被RASSF2的干涉質(zhì)粒部分逆轉(zhuǎn)。Western Blot檢測(cè)和RT-PCR結(jié)果證實(shí)，p300激活了HGC-27細(xì)胞中RASSF2基因的表達(dá)。這說(shuō)明，在HGC-27細(xì)胞中，p300通過(guò)激活RASSF2抑制細(xì)胞增殖。
　　流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)p300或抑制RASSF2表達(dá)都能誘導(dǎo)HGC-27細(xì)胞中S期細(xì)胞數(shù)明顯增加，而G2/M期細(xì)胞數(shù)明顯下降。而共轉(zhuǎn)染p300過(guò)表達(dá)質(zhì)粒與RASSF2siRNA

3、質(zhì)粒時(shí)，S期以及G2/M期的細(xì)胞數(shù)都恢復(fù)到了與對(duì)照組相近的水平。Western Blot結(jié)果表明，p300激活RASSF2基因表達(dá)能夠促進(jìn)HGC-27細(xì)胞中p21的表達(dá)，以及磷酸化pRb對(duì)未被磷酸化 pRb蛋白表達(dá)的比例。同時(shí)p300激活RASSF2基因?qū)е铝姿峄痯38蛋白表達(dá)水平的下降。以上結(jié)果說(shuō)明，p300通過(guò)激活RASSF2影響了HGC-27細(xì)胞周期相關(guān)因子的表達(dá)水平，誘導(dǎo)S/G2細(xì)胞周期停滯。
　　另外，染色質(zhì)免疫沉淀(C