2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景及目的:
  腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是細胞能量調節(jié)的感受器。研究資料表明,AMPK激活劑二甲雙胍及AICAR可對多種腫瘤細胞產生增殖抑制作用,其功能與AMPK對細胞周期調控作用密切相關。目前有關AMPK激活劑對肝癌細胞增殖抑制、細胞周期影響的報道較少,未見詳細機制的報道。本研究將通過AMPK激活劑二甲雙胍及AICAR對肝癌細胞株HepG2的增殖抑制、細胞周期影響

2、及其作用機制的研究,為AMPK成為抗腫瘤治療的新靶點提供新的理論依據。
  材料和方法:
  1.用含10%胎牛血清,100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝癌細胞株HepG2細胞。
  2.用含不同濃度二甲雙胍(2.5、5.0、10、20mM),AICAR(50、100、250、500μM)的培養(yǎng)基分別處理HepG2細胞24、48、72h,以未予藥物處理細胞為對照,噻唑藍比色法(M

3、TT法)檢測二甲雙胍及AICAR對HepG2細胞增殖的影響。
  3. HepG2細胞用含10mM的二甲雙胍的培養(yǎng)基和500μM的AICAR的培養(yǎng)基作用72h,經碘化丙啶(PI)單染法,用流式細胞分析儀(FCM)檢測HepG2細胞周期情況。
  4.用含10mM的二甲雙胍培養(yǎng)基和500μM的AICAR的培養(yǎng)基作用HepG2細胞24h, Western Blot檢測AMPK磷酸化程度、以及G1/S調節(jié)點細胞周期調節(jié)蛋白p21C

4、IP、p27KIP、cyclin D1、CDC2、CDK2表達量。
  5. HepG2細胞用含10mM的二甲雙胍的培養(yǎng)基和500μM的 AICAR的培養(yǎng)基作用24h,DAPI染色后熒光顯微鏡下觀察HepG2細胞凋亡情況。
  結果:
  1. Western blot結果顯示,經二甲雙胍及AICAR處理后,HepG2細胞AMPK磷酸化程度較對照組增強。
  2. MTT法檢測結果顯示,與對照組比較,二甲雙胍及A

5、ICAR能抑制HepG2細胞的生長,并且呈濃度和時間依賴性。
  3.流式細胞術檢測結果顯示,HepG2細胞經二甲雙胍及AICAR處理24h后,細胞周期發(fā)生G0-G1期停滯,G0-G1期百分比和對照組相比較,差別具有統(tǒng)計學意義。
  4. Western Blot結果顯示,經二甲雙胍及AICAR處理后,HepG2細胞p21CIP和p27KIP表達較對照組增強,cyclin D1表達較對照組減弱, CDK2、CDC2表達與對照

6、組比較無明顯變化。
  5. DAPI染色觀察可見,HepG2細胞經二甲雙胍及AICAR處理24h后,鏡下可見部分細胞核碎裂,細胞發(fā)生凋亡。
  結論:
  1. AMPK激活劑誘導HepG2細胞增殖抑制。
  2. AMPK激活劑誘導HepG2細胞發(fā)生G0-G1期細胞周期停滯。
  3. AMPK激活劑磷酸化激活HepG2細胞AMPK,上調p21CIP、p27KIP表達量,下調cyclinD1表達量,CD

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