白藜蘆醇誘導(dǎo)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制探討.pdf

1、目的：1)檢測(cè)在體情況下人髓母細(xì)胞瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白caspase8的表達(dá)特點(diǎn)；2)研究人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-2和-3凋亡相關(guān)蛋白caspase8及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinA、cyclinB1和cdc25A的表達(dá)情況；3)探討白藜蘆醇對(duì)caspase8、cyclinA、cyclinB1和cdc25A表達(dá)的影響；4)觀察反義寡核苷酸封閉c-Myc基因后cyclinA和cyclinB1表達(dá)水平的變化。通過(guò)上述研究，進(jìn)一步了解白

2、藜蘆醇誘導(dǎo)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制，以期加深對(duì)髓母細(xì)胞瘤分子生物學(xué)特點(diǎn)的認(rèn)識(shí)，為改善臨床髓母細(xì)胞瘤的治療現(xiàn)狀提供新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和理論根據(jù)。 方法：人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-2和-3培養(yǎng)于含有10﹪胎牛血清的DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium，GIBCO)培養(yǎng)基中，分別用100μM白藜蘆醇(resveratrol)及0.6μMc-Myc反義寡核苷酸處理細(xì)胞，觀察它們對(duì)靶

3、細(xì)胞的作用特點(diǎn)；采取臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法對(duì)細(xì)胞的增殖活性進(jìn)行檢測(cè)；采用免疫細(xì)胞化學(xué)、Westernblot和RT-PCR等方法分析各實(shí)驗(yàn)組中caspase8、cyclinA、cyclinB1和cdc25A基因表達(dá)水平的改變以及與白藜蘆醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的關(guān)系。將臨床收集的石蠟包埋標(biāo)本(髓母細(xì)胞瘤及瘤旁相對(duì)正常腦組織)制成石蠟組織陣列，進(jìn)行caspase8的免疫組織化學(xué)染色。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)UW228-2和-3細(xì)胞系細(xì)胞

4、周期及細(xì)胞凋亡情況的影響。通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染UW228-2細(xì)胞封閉c-Myc基因，來(lái)觀察cyclinA、cyclinB1表達(dá)的變化。 結(jié)果：1)在10例人髓母細(xì)胞瘤組織中，僅有5例caspase8表達(dá)陽(yáng)性，且與瘤旁相對(duì)正常腦組織相比，表達(dá)水平降低；2)白藜蘆醇處理后UW228-2細(xì)胞caspase8的表達(dá)明顯升高，且免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示大部分細(xì)胞出現(xiàn)核內(nèi)著色的情況，而在UW228-3細(xì)胞升高不明顯；3)經(jīng)白藜蘆醇處理后，cyc

5、linA和cyclinB1mRNA的表達(dá)下調(diào)，cdc25AmRNA的表達(dá)上調(diào)；4)與mRNA水平一致，cyclinA蛋白的表達(dá)水平也呈現(xiàn)下調(diào)；5)在UW228-2中，用反義寡核苷酸阻斷c-Myc基因的表達(dá)后，cyclinA和cyclinB1的mRNA水平均降低。 結(jié)論：1)Capase8在髓母細(xì)胞瘤中表達(dá)下調(diào)；2)白藜蘆醇不僅可以上調(diào)caspase8在髓母細(xì)胞瘤中的表達(dá)，而且能促進(jìn)caspase8的活化；3)白藜蘆醇可能通過(guò)抑制