白藜蘆醇對人腎癌786-0細(xì)胞周期、凋亡及凋亡相關(guān)基因PDCD5表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討白藜蘆醇對人腎癌786-0細(xì)胞凋亡相關(guān)基因PDCD5 mRNA、蛋白表達(dá)及其細(xì)胞周期、增殖的影響。
　　 方法：人腎癌786-0細(xì)胞，經(jīng)復(fù)蘇孵育，體外培養(yǎng)至對數(shù)生長期傳代分為不同的實(shí)驗(yàn)組，分別用12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇(RES)分別處理腎癌786-0細(xì)胞24h、48h、72h。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法和原位雜交技術(shù)檢測各組細(xì)胞中P

2、DCD5蛋白和mRNA的表達(dá)情況；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組細(xì)胞的增殖情況；應(yīng)用TUNEL法檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果
　　 1.倒置顯微鏡下觀察人腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞發(fā)現(xiàn)：細(xì)胞外形為梭形，圓形或多邊形。細(xì)胞輪廓不模糊。說明人腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞生長狀態(tài)較好。經(jīng)過白藜蘆醇處理過24h后的人腎細(xì)胞癌786-0細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞的體積縮小細(xì)胞核發(fā)生縮小、變圓等現(xiàn)象。
　　 2.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果：

3、經(jīng)過12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4種不同濃度的白藜蘆醇(RES)處理人腎癌786-0細(xì)胞24h、48h、72h后PDCD5蛋白表達(dá)開始升高。25μmol/L白藜蘆醇作用24h后，PDCD5蛋白表達(dá)狀況為：2.90±0.13，3.08±0.21，3.23±0.21與空白對照組(1.10±0.19，1.13±0.21，1.42±0.25)相比，差異有顯著性，(P<0.05)。繼續(xù)升高藥物濃度P

4、DCD5蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且當(dāng)作用時(shí)間達(dá)到24小時(shí)后，繼續(xù)增加作用時(shí)間，PDCD5蛋白表達(dá)增高之間的差異也沒有顯著性(P>0.05)。
　　 3.原位雜交結(jié)果：12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L4種不同濃度的白藜蘆醇處理人腎癌786-0細(xì)胞1d、2d、3d后PDCD5 mRNA的表達(dá)就開始升高。當(dāng)白藜蘆醇濃度達(dá)到25μmol/L，PDCD5 mRNA的表達(dá)情況為3

5、.35±0.23，3.40±0.31，3.60±0.26與空白對照組相比(1.47±0.27，1.78±0.38，1.88±0.31)(P<0.05)。且當(dāng)作用時(shí)間達(dá)到24小時(shí)后，繼續(xù)增加作用時(shí)間，PDCD5mRNA表達(dá)增高之間的差異也沒有顯著性(P>0.05)。
　　 4.流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期的變化：人腎癌786-0細(xì)胞在經(jīng)12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L的白藜蘆醇(RES)處理

6、24h后，25μmol/L白藜蘆醇處理組G1期細(xì)胞的比例為：65.28±3.10，G2期細(xì)胞的比例為9.67±0.43較空白對照組的細(xì)胞比例：75.23±2.58、11.35±2.37有所下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。25μmol/L白藜蘆醇處理組S期的細(xì)胞比例為24.79±3.72較空白對照組的細(xì)胞比例13.17±1.36有所升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，繼續(xù)升高藥物濃度各組間的差異無顯著性(P>0.05)。<

7、br>　　 5.TUNEL結(jié)果：25μmol/L白藜蘆醇處理組人腎癌786-0細(xì)胞凋亡的比例為：6.01±0.59，較空白對照組的細(xì)胞凋亡比例：0.73±0.25有所下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)白藜蘆醇的作用時(shí)間達(dá)到24小時(shí)后，繼續(xù)增加作用時(shí)間白藜蘆醇處理組人腎癌786-0細(xì)胞凋亡的比例分為：5.90±0.50，5，97±0.25，較空白對照組的細(xì)胞凋亡比例：0.90±0.20，，1.10±0.20升高明顯，差異有統(tǒng)計(jì)