凋亡相關基因PDCD5、Survivin在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義研究.pdf

1、1目的：
　　 肺癌是危害人類健康的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率極高,且在老年人群中高發(fā)。近年來,多項研究表明肺癌的發(fā)生、發(fā)展不僅與原癌基因的激活、抑癌基因的失活導致細胞增生過度和分化異常有關,還與細胞凋亡異常有關。PDCD5是人程序化死亡因子5,Survivin是生存蛋白。研究表明PDCD5是凋亡促進基因,Survivin是凋亡抑制基因。通過凋亡相關基因PDCD5、Survivin在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達情況及相

2、關性的研究,來探討PDCD5、Survivin的臨床生物學意義及NSCLC的發(fā)病機制,為NSCLC的早期診斷、治療提供實驗依據(jù)。
　　 2對象與方法：
　　 2.1研究對象
　　 收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科2008年1月～2009年11月間胸外科手術切除并經(jīng)病理證實為NSCLC的肺癌組織標本60例作為實驗組,同時取20例NSCLC癌旁正常肺組織(即距腫瘤邊緣大于3cm并經(jīng)病理證實為正常的肺組織)作為對照組。所

3、有入選的肺癌病人術前均未接受任何抗腫瘤治療。
　　 2.2實驗方法
　　 采用免疫組化S-P法檢測PDCD5、Survivin在肺腺癌、肺鱗癌及癌旁正常肺組織中的表達情況。采用TUNEL法檢測凋亡細胞,計算凋亡指數(shù)AI。
　　 2.3結(jié)果判定標準
　　 2.3.1 PDCD5、Survivin的陽性結(jié)果判定標準
　　 在20×10高倍視野下,隨機選取5個有陽性細胞存在的視野進行計數(shù),每個視野計數(shù)1

4、00個細胞,共500個細胞。PDCD5以細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,Survivin以胞漿／胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒計為陽性細胞。判定方法:(1)按陽性細胞所占百分數(shù)評分:0分:0％,1分:<10％,2分:10％～50％,3分:>50％。(2)按細胞染色深淺評分:無棕黃色顆粒,與背景無區(qū)別為0分；有棕黃色顆粒,明顯高于背景底色為1分；有染色較清晰的棕黃色顆粒,介于強弱之間為2分；有大量的深棕色顆粒,染色強為3分。綜合染色強度和陽性細胞所占百分數(shù)

5、進行判定,即(1)+(2):最后得分≥4分為陽性表達(+),<4分為陰性表達(一)。
　　 2.3.2凋亡細胞的陽性結(jié)果判定及凋亡指數(shù)AI的計算
　　 用TUNEL法對凋亡細胞進行檢測,所測得的凋亡細胞為細胞核染成棕黃色的細胞。凋亡指數(shù)AI的計算:在40×10高倍視野下隨機選取10個視野觀察,計算凋亡細胞與所計數(shù)細胞總數(shù)的比值,即AI=凋亡細胞數(shù)／細胞總數(shù)×100％。
　　 2.4統(tǒng)計學處理
　　 實驗數(shù)

6、據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。統(tǒng)計方法:卡方檢驗,卡方檢驗的連續(xù)性校正,配對資料的關聯(lián)性分析及直線相關分析,以α=0.05為檢驗水準。
　　 3結(jié)果：
　　 3.1 PDCD5在正常肺組織和NSCLC組織中的表達及其與臨床病理特征的關系
　　 PDCD5主要表達于正常肺組織上皮細胞,NSCLC細胞胞漿也有表達,但染色強度明顯弱于正常肺組織,陽性細胞數(shù)也明顯少于正常肺組織,染色為淺黃色至棕黃色。60例NS

7、CLC組織中PDCD5的陽性表達率為25.0％(15／60),20例正常肺組織的陽性表達率為70.0％(14／20),差異有統(tǒng)計學意義(x2=13.144,P=0.000)。PDCD5在NSCLC高分化組中的陽性表達率為60.0％,中、低分化組的陽性表達率為18.0％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=5.760,P=0.016)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的陽性表達率為38.9％,Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達率為4.2％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=9.259,P=

8、0.002)。PDCD5在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者中的陽性表達率為3.7％,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達率為42.4％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=11.874,P=0.001)。PDCD5的表達與NSCLC患者的年齡、性別、腫瘤直徑、病理分型、是否吸煙及有無胸膜轉(zhuǎn)移無關。
　　 3.2 Survivin在正常肺組織和NSCLC組織中的表達及其與臨床病理特征的關系
　　 Survivin主要定位于胞漿或胞核。60例NSCLC組

9、織中Survivin的陽性表達率為46.7％(28／60),20例正常肺組織的陽性表達率為10.0％(2／20),差異有統(tǒng)計學意義(x2=8.604,P=0.003)。Survivin在NSCLC高分化組中的陽性表達率為10.0％,中、低分化組陽性表達率為54.0％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=4.835,P=0.028)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的陽性表達率為33.3％,Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達率為66.7％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=6.429,P=

10、0.011)。Survivin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC患者中的陽性表達率為74.1％,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達率為24.2％,差異有統(tǒng)計學意義(x2=14.816,P=0.000)。Survivin的表達與NSCLC患者的年齡、性別、腫瘤直徑、病理分型、是否吸煙及有無胸膜轉(zhuǎn)移無關。
　　 3.3 NSCLC組織中PDCD5和Survivin表達的相關性
　　 配對資料的關聯(lián)性分析得出,PDCD5和Survivin在NSC

11、LC組織中的表達存在關聯(lián)性,為負相關(x2=8.929,P=0.003,r=-0.386)。
　　 3.4 PDCD5、Survivin與細胞凋亡之間的關系
　　 直線相關分析得出,PDCD5積分與凋亡指數(shù)AI成正相關(r=0.663,P=0.000),Survivin積分與凋亡指數(shù)AI成負相關(r=-0.736,P=0.000)。
　　 4結(jié)論：
　　 1、PDCD5、Survivin基因的異常表達可能