凋亡相關(guān)基因P53、Fas-Fasl在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義研究.pdf

1、1.背景及目的
　　 肺部惡性腫瘤是目前臨床較多見(jiàn)的危害人類(lèi)生命健康的惡性腫瘤之一，近年來(lái)肺癌的發(fā)病率逐年增高，發(fā)病人群越來(lái)越年輕化。肺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，包括多種基因、多種因素的共同作用，包括原癌基因被激活、抑癌基因失活、凋亡相關(guān)基因的異常表達(dá)等。
　　 P53基因是一種抑癌基因，其可以通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定基因組等方式，從而抑制腫瘤細(xì)胞的周期，抑制腫瘤細(xì)胞無(wú)限惡性增殖，達(dá)到抑制癌基因增殖，腫瘤發(fā)展的作用。突變

2、型P53和野生型P53是P53基因的常見(jiàn)兩種類(lèi)型，突變型P53則不同于野生型P53，它是一種促癌基因，與可能發(fā)生癌變或已經(jīng)發(fā)生癌變的細(xì)胞結(jié)合，不能抑制腫瘤細(xì)胞的周期。因此與腫瘤的預(yù)后差，轉(zhuǎn)移率高，化療耐藥，放療不敏感有關(guān)。Fasl是腫瘤壞死因子家族的三聚體跨膜蛋白，F(xiàn)asl與其受體Fas結(jié)合而誘導(dǎo)攜帶Fas的細(xì)胞凋亡。最新研究表明Fas/Fasl表達(dá)異常是腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫攻擊的新機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)凋亡相關(guān)基因P53、Fas/Fasl

3、在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，以及這些基因之間的相關(guān)性，為NSCLC的早期診斷、治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 2.對(duì)象與方法
　　 2.1.研究對(duì)象
　　 實(shí)驗(yàn)組:鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2011年～2012年間由胸外科手術(shù)切除標(biāo)本，共60例，均被病理學(xué)證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌組織。
　　 對(duì)照組:已經(jīng)被病理學(xué)證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌的癌旁正常組織（即距腫瘤邊緣超過(guò)3cm），共20例。
　　 所選非小細(xì)胞肺癌的患者均

4、為首次發(fā)現(xiàn)，之前未接受任何方式的有關(guān)抗癌治療。
　　 2.2.實(shí)驗(yàn)方法
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)運(yùn)用免疫組化（S-P法）檢測(cè)P53、Fas、Fasl在非小細(xì)胞肺癌（肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌）和癌旁的正常組織中的表達(dá)。凋亡細(xì)胞檢測(cè)則用TUNEL法。
　　 2.3.判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 2.3.1.P53、Fas、Fasl的陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
　　 在400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)方法為:100個(gè)細(xì)胞/每視野×

5、5=500個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒表示P53陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞漿/細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒表示Fas表達(dá)陽(yáng)性，細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒則是Fasl表達(dá)陽(yáng)性。判定因素:顯色強(qiáng)度分值+陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分值，①細(xì)胞顯色程度分值設(shè)置方法:無(wú)棕黃色顆粒，顏色與背景無(wú)明顯區(qū)別記為0分;有棕黃色顆粒，顏色高于背景底色記為1分;有染色較清晰的棕黃色顆粒，介于1分與3分之間記為2分;深棕黃色顆粒多，顏色明顯比背景顏色強(qiáng)的記為3分。②陽(yáng)性細(xì)胞比例分值設(shè)置方法:0分

6、:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞;1分:陽(yáng)性細(xì)胞比例小于10％;2分:陽(yáng)性細(xì)胞比例介于10％～50％;3分:陽(yáng)性細(xì)胞比例大于50％。①+②結(jié)果所得分值綜合判斷陽(yáng)性表達(dá)，最后得分超過(guò)或等于4分為表達(dá)陽(yáng)性，低于4分為表達(dá)陰性。
　　 2.3.2.判定凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性以及凋亡指數(shù)(AI)
　　 通過(guò)采用TUNEL法檢測(cè)凋亡細(xì)胞，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性就是檢測(cè)出來(lái)的那些細(xì)胞核被染成棕黃色的細(xì)胞。凋亡指數(shù)(AI)的計(jì)算方法:在400倍視野下任意選取10個(gè)視野，計(jì)

7、數(shù)所測(cè)的凋亡細(xì)胞，凋亡指數(shù)=凋亡細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)×100％。
　　 2.4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 分析本實(shí)驗(yàn)所得出的數(shù)據(jù)均使用的統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS17.0。所運(yùn)用到的統(tǒng)計(jì)方法有:①卡方檢驗(yàn)，②卡方檢驗(yàn)的連續(xù)性校正（理論頻數(shù)＜5），③配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析（spearman分析），④直線相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
　　 3.結(jié)果
　　 3.1.P53在非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系<

8、br>　　 P53陽(yáng)性表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞核染成棕黃色，P53在60例NSCLC中表達(dá)的陽(yáng)性率為58.3％(35/60)，P53在正常肺組織中不表達(dá)(0/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=20.741，P=0.000)。P53在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)的陽(yáng)性率為70.6％，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)的陽(yáng)性率為42.3％，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.848，P=0.028)。P53的表達(dá)與NSCLC患者的自身因素中的性別、年齡、是否吸

9、煙，以及腫瘤因素的腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、病理分型、有無(wú)胸膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。
　　 3.2.Fas在非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 Fas陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞漿。Fas在60例NSCLC組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為46.7％(28/60)，在20例正常組織的表達(dá)的陽(yáng)性率為100％(20/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=14.359，P=0.000)。Fas在NSCLC的高分化組中的表達(dá)的

10、陽(yáng)性率為78.6％，在中、低分化組表達(dá)的陽(yáng)性率為37.0％，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.468，P=0.006)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ期的表達(dá)的陽(yáng)性率為57.5％，Ⅲ、Ⅳ期的表達(dá)的陽(yáng)性率為25％，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.658，P=0.017)。Fas的表達(dá)與NSCLC患者自身因素中的年齡、性別、是否吸煙，以及腫瘤因素中的腫瘤直徑、病理分型、伴或不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及有無(wú)胸膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。
　　 3.3.Fasl在非小細(xì)

11、胞肺癌組織的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系
　　 Fasl陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿。Fasl在60例NSCLC組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為68.23％(41/60)，在20例正常組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為15％(3/20)，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=17.239，P=0.000)。Fasl在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)的陽(yáng)性率為85.3％，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達(dá)陽(yáng)性率為53.8％，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=10.431，P=0.001)。

12、Fasl的表達(dá)與NSCLC患者自身因素中的年齡、性別、是否吸煙，以及腫瘤因素中的腫瘤直徑、病理分型、TNM分期、分化程度、有無(wú)胸膜轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。
　　 3.4.NSCLC組織中P53、Fas、Fasl表達(dá)的相關(guān)性分析
　　 應(yīng)用配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果示:P53和Fas在NSCLC組織中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(r=-0.361，x2=7.837，P=0.005)。P53和Fasl在NSCLC組織中的表達(dá)存在正相關(guān)(r=0.297，

13、x2=5.284，P=0.022)。Fas和Fasl在NSCLC組織中的表達(dá)不存在相關(guān)性(r=-0.225，x2=3.038，P=0.082)。
　　 3.5P53、Fas、Fasl與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系分析
　　 采用直線相關(guān)分析結(jié)果示:P53與凋亡指數(shù)（AI）成負(fù)相關(guān)(r=-0.684，P=0.000)，F(xiàn)asl與凋亡指數(shù)(AI)成負(fù)相關(guān)（r=-0.702，P=0.000）。Fas與凋亡指數(shù)(AI)成正相關(guān)(r=0.7