白藜蘆醇對裸鼠胃癌移植瘤組織中凋亡相關基因PDCD5表達影響的研究.pdf

1、背景和目的:胃癌是我省乃至我國常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多步驟以及多基因參與的復雜過程。許多研究表明胃癌的發(fā)生、發(fā)展不但與癌基因、抑癌基因有關,而且還與凋亡相關基因相關。人程序化死亡分子5(the human programmed cell death5,PDCD5)基因,原名為TFAR19(TF-1 cell apoptosis related gene19),是由北京大學人類疾病基因中心從人白血病細胞株TF-1細

2、胞中克隆的與凋亡相關的新基因,PDCD5在人類50多種正常組織中存在不同程度的表達,尤其在成年人的心肌、睪丸、腎上腺、腎臟及胎盤中均呈高表達,而在胚胎組織中的表達均遠低于成年組織。在人體出現(xiàn)疾病時的組織,特別是腫瘤組織中低表達或不表達。研究表明,PDCD5促進多種細胞凋亡,在凋亡過程中表達增加。外源性的PDCD5經(jīng)一定方式導入多種細胞系后,其對細胞生物學特征沒有產(chǎn)生明顯的影響,說明其單獨作用效能低。但如果采用化療藥物處理、TRAL處理、

3、撤除細胞因子、撤除血清、射線輻照、抗FAS抗體處理等,均可明顯促進細胞凋亡。研究結果表明PDCD5是有效的凋亡促進劑,而非凋亡誘導劑。白藜蘆醇(resveratrol,Res)是廣泛存在于葡萄、花生、虎杖等藥用植物中的多酚類化合物,為一種低毒的天然藥物,其對消化、呼吸、生殖、血液等系統(tǒng)來源的腫瘤細胞生長有顯著的抑制作用,并可誘導腫瘤細胞凋亡。
　　本課題組已體外觀察了白藜蘆醇對胃腺癌BGC-823細胞生長的抑制作用以及對BGC-8

4、23細胞中PDCD5蛋白和mRNA表達的影響。為進一步深入探討白藜蘆醇對胃癌細胞中凋亡相關基因PDCD5表達的影響,本研究構建裸鼠胃癌移植瘤模型,運用免疫組織化學SP法檢測移植瘤組織中PDCD5蛋白表達;采用原位雜交方法檢測移植瘤組織中PDCD5 mRNA表達;采用TUNEL法檢測移植瘤細胞的凋亡程度。
　　材料和方法:1.標本及分組構建裸鼠胃癌移植瘤模型:人胃低分化腺癌BGC-823細胞購自中科院上海細胞生物學研究所。將BGC-

5、823細胞復蘇后,實驗組采用200μmol/L的白藜蘆醇處理BGC-823細胞72h(本課題組體外實驗已證實此濃度和此作用時間效果最好),并設空白對照組(培養(yǎng)液對照組),順鉑組(3μg/ml),聯(lián)合用藥組(白藜蘆醇200μmol/L+順鉑3μg/ml)。分組將細胞種植于裸鼠皮下,構建裸鼠胃癌移植瘤模型。2.運用免疫細胞化學SP法檢測各組胃癌移植瘤組織中PDCD5的蛋白表達。3.應用原位雜交技術檢測各組胃癌移植瘤組織中PDCD5的mRNA

6、表達。4.采用TUNEL法檢測胃癌移植瘤細胞的凋亡程度。5.采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,計量資料以均數(shù)±標準差(±S)表示,兩組均數(shù)的比較采用t檢驗(t-test);兩組以上均數(shù)的比較采用方差分析(ANVOA);以a=0.05為顯著性檢驗標準。
　　結果:1.PDCD5蛋白及mRNA在胃癌移植瘤細胞中的表達:PDCD5蛋白定位于胃癌移植瘤組織細胞胞質(zhì)中,呈棕黃色顆粒;PDCD5 mRNA亦定位于胃癌移植瘤組織細胞胞質(zhì)

7、中,呈藍紫色顆粒。2.免疫組織化學:200μmol/L白藜蘆醇處理的實驗組中PDCD5蛋白表達水平(10.18±0.87)明顯高于空白對照組(1.96±0.12),但低于順鉑組(15.20±1.75)和聯(lián)合用藥組(18.93±1.97)。上述各組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.原位雜交:200μmol/L白藜蘆醇處理的實驗組中PDCD5 mRNA表達水平(8.23±0.79)明顯高于空白對照組(1.78±0.10),但

8、低于順鉑組(14.56±1.72)和聯(lián)合用藥組(18.09±1.91)。上述各組兩兩相比,差異均有顯著性(P<0.05)。4.TUNEL染色:TUNEL法檢測到胃癌移植瘤中凋亡細胞的細胞核呈棕褐色,染色深淺不一,染色質(zhì)分布不均。空白對照組中僅見到少數(shù)凋亡細胞,白藜蘆醇處理組、順鉑組和聯(lián)合用藥組細胞凋亡指數(shù)依次增加,上述各組兩兩相比,差異均有顯著性(P<0.05)。
　　結論:1.白藜蘆醇可上調(diào)裸鼠胃癌移植瘤細胞中PDCD5的蛋白表