CathepsinL在白藜蘆醇誘導(dǎo)的腦膠質(zhì)瘤細胞凋亡及細胞周期阻滯中的作用.pdf

1、目的：
　　本課題以人腦膠質(zhì)瘤U251和U87細胞為模型，初步探討cathepsin L在白藜蘆醇(resveratrol)誘導(dǎo)細胞增殖、凋亡中的作用及其機制。
　　方法：
　　采用CCK-8法檢測細胞活性；集落形成以及annexin V/PI雙染流式實驗檢測 resveratrol對膠質(zhì)瘤細胞 U251和 U87的細胞毒性作用。Western blot檢測resveratrol對cathepsin L以及cyclin

2、A、cyclin B1、cyclin D1和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax表達水平的影響，免疫熒光染色檢測cathepsin L的變化。PI單染檢測藥物對膠質(zhì)瘤細胞周期的影響。用siRNA干擾cathepsin L觀察resveratrol對細胞周期及細胞凋亡的影響。U87細胞轉(zhuǎn)染p53突變質(zhì)粒后，觀察細胞對resveratrol的敏感性變化。
　　結(jié)果：
　　Western blot結(jié)果顯示resveratrol能夠顯著激

3、活cathepsin L,免疫熒光實驗進一步驗證了給藥后膠質(zhì)瘤細胞 cathepsin L的增加。CCK-8、集落形成實驗及流式細胞術(shù)及 western blot結(jié)果提示, resveratrol能夠誘導(dǎo)細胞的凋亡；U87細胞對resveratrol的敏感性比U251細胞更強。PI單染流式細胞術(shù)結(jié)果表明resveratrol可以引起U251細胞G1期阻滯，U87細胞為S期阻滯。Resveratrol可以明顯下調(diào)細胞周期蛋白的表達水平，表

4、明 resveratrol確實能夠誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞周期阻滯。在干擾cathepsin L以后由resveratrol引起的細胞毒性增強，克隆形成率明顯降低，細胞周期阻滯作用增強。U87細胞轉(zhuǎn)染p53突變質(zhì)粒后，細胞對resveratrol的敏感性減弱。
　　結(jié)論：
　　Cathepsin L參與了resveratrol對膠質(zhì)瘤細胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡和細胞周期阻滯的作用，抑制cathepsin L可以增強膠質(zhì)瘤細胞對resver