紫杉醇對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期阻滯及增殖抑制的研究.pdf

1、神經(jīng)膠質(zhì)瘤(gliomas)是顱腦最常見的腫瘤，在我國占顱腦腫瘤的35.26％-60.96％，居顱腦惡性腫瘤的第一位。腦膠質(zhì)瘤具有廣泛的侵襲性，由低級別向高級別進展的特性，以及高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高死亡率特點，給人類健康造成了極大危害。目前，治療腦膠質(zhì)瘤的主要手段是手術(shù)切除配合放、化療，盡管如此，惡性腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后中位生存期尚不足兩年。紫杉醇(Paclitaxel，PTX)作為臨床化學(xué)治療腫瘤的一類生物堿類藥物，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于乳腺癌

2、、卵巢癌、腦腫瘤等腫瘤的化學(xué)治療，其獨特的抗癌機制引起了許多專家學(xué)者的關(guān)注，并且有望成作為腦膠質(zhì)瘤的化學(xué)治療藥物或放射增敏劑。
　　目的：
　　本研究旨在探討PTX對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制的相關(guān)機制，為其在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.篩選細(xì)胞：初步定為神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U373，并準(zhǔn)備相關(guān)實驗試劑及材料，閱讀相關(guān)實驗文獻(xiàn)并學(xué)習(xí)熟悉其中需要用到多種方法及原理。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)：培養(yǎng)

3、生長狀況良好的細(xì)胞，熟悉U373細(xì)胞的生長周期，了解細(xì)胞的形狀及特征。
　　3.MTT法檢測細(xì)胞活性，測定細(xì)胞的增殖抑制率，并以此將實驗分組，進行以下各實驗。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)測定不同實驗組的細(xì)胞周期分布情況。
　　5.應(yīng)用免疫熒光化學(xué)方法在熒光顯微鏡下觀察不同實驗組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。
　　6.提取各組細(xì)胞RNA，反轉(zhuǎn)錄cDNA并擴增細(xì)胞周期基因DNA，然后應(yīng)用凝膠電泳法檢測不同實驗組RNA水平的變化。

4、　　7。提取各組細(xì)胞蛋白，應(yīng)用WesternBlotting方法檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化。
　　8.應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)分析軟件(SPSS11.0)給予統(tǒng)計學(xué)相關(guān)處理。
　　結(jié)果：
　　1.PTX可以明顯抑制U373細(xì)胞的增殖活性，抑制作用呈時間濃度依賴性。
　　2.細(xì)胞周期分析顯示，實驗組細(xì)胞G2/M期比例增高，且呈現(xiàn)時間依賴性。
　　3.細(xì)胞免疫熒光顯示實驗組細(xì)胞被阻滯于有絲分裂期，增加了微管的穩(wěn)定性，

5、使微管解聚障礙。
　　4.RT-PCR法顯示，PTX可增加CDK1和CyclinB1相關(guān)RNA水平的表達(dá)，降低CyclinD1相關(guān)RNA水平的表達(dá)，而對CDK2相關(guān)RNA則影響不大。
　　5.WesternBlotting法顯示，PTX可增加CDK1和CyclinB1相關(guān)蛋白水平的表達(dá)，降低CyclinD1相關(guān)蛋白水平的表達(dá)，而對CDK2相關(guān)蛋白則影響不大。
　　結(jié)論：
　　PTX能夠抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤U373細(xì)胞增